[發明專利]一種檢測MYL3基因突變的引物探針組合物及其應用

在審

• 申請號: 202110402351.5
• 申請日: 2021-04-14
• 公開（公告）號: CN112941173A
• 公開（公告）日: 2021-06-11
• 發明（設計）人: 趙躍;黎江溪
• 申請（專利權）人: 大理大學
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟

本發明提供了一種檢測MYL3基因突變的引物探針組合物及其應用，所述檢測MYL3基因突變的引物探針組合物包括檢測MYL3基因突變位點c.374AC的實時熒光PCR引物和探針。本發明還提供了一種檢測MYL3基因突變的試劑盒及所述的檢測MYL3基因突變的試劑盒以非疾病診斷和/或治療為目的的使用方法。所述引物探針組合物具有良好的特異性；所述檢測MYL3基因突變的試劑盒靈敏度高，特異性好；所述試劑盒的使用方法準確性好，耗時較短，可同時對大量樣本進行檢測，具有廣闊的應用前景。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，尤其涉及一種檢測MYL3基因突變的引物探針組合物及其應用。

背景技術

肥厚型心肌病(Hypertrophic cardiomyopathy，HCM)是一種以左心室或雙心室不對稱性肥厚或心肌肥大為特征的遺傳性心臟疾病，主要病理特征為心肌細胞彌漫性肥大、畸形、核大、深染和心肌纖維紊亂等。

HCM是一種“肌節疾病”，許多研究表明，肌節蛋白基因變異是HCM的主要致病原因。心臟肌節主要包括粗肌絲和細肌絲，肌節相關基因位點的突變，破壞了肌球蛋白和肌動蛋白之間的肌絲滑動，改變了心肌細胞內的鈣信號通路，影響了左心室的發育和心肌壁的結構，進而導致心臟的功能不全。MYL3是HCM的主要致病基因之一，該基因高表達于心肌組織，編碼肌球蛋白輕鏈3，是肌小節粗肌絲肌球蛋白六聚體的重要組成部分，在心肌收縮中起到重要的調節作用。MYL3基因突變后，可能通過增強對Ca²⁺的誘捕導致細胞內Ca²⁺釋放異常，激活了Ca²⁺依賴性的信號轉導途徑，使心肌細胞重塑，最終導致HCM的發生。

目前，遺傳疾病基因突變的檢測方法很多，如：限制性片段長度多態性、SNP shot多重PCR技術、高分辨率溶解曲線分析、PCR擴增直接進行毛細管電泳測序和高通量測序等。毛細管電泳技術是基因突變檢測的金標準，但因其具有對設備的要求高、價格昂貴等缺點，很難從實驗室普及到臨床。CN111411149A公開了一種檢測肥厚型心肌病基因突變的引物組、試劑盒和方法，通過對88個突變位點的引物組進行聯合檢測，成本較低，且無需熒光標記，適合大量樣本的批量篩查。但該檢測方法需要借助于復雜的專用儀器及基因分型系統，限制了產品的推廣與使用，且對檢測人員的技術水平要求較高。

對HCM患者進行基因檢測和家族篩查能夠為臨床提供重要的指導作用。如何建立一種簡便、快速、經濟和準確的HCM基因突變篩查方法，為HCM的預防、輔助臨床診斷和預后評估提供技術支持，已成為亟待解決的問題。

發明內容

針對現有技術的不足和實際需求，本發明提供一種檢測MYL3基因突變的引物探針組合物及其應用，使用不同的熒光報告基團對野生型MYL3的探針和突變型MYL3的探針分別進行標記，再將待測樣本與質控品一同進行擴增，根據熒光信號的相對強度即可確認樣本的基因型，操作簡單，成本較低。

為達此目的，本發明采用如下技術方案：

第一方面，本發明提供了一種檢測MYL3基因突變的引物探針組合物，所述檢測MYL3基因突變的引物探針組合物包括檢測MYL3基因突變位點c.374AC的實時熒光PCR引物和探針。

本發明中，所述熒光PCR引物可對MYL3基因中一段長度為134bp的片段進行特異性擴增，進而對MYL3基因突變位點c.374AC進行快速檢測，操作簡單，耗時較短，準確性好，具有廣闊的應用前景。

優選地，所述實時熒光PCR引物包括SEQ ID No.1～2所示的核苷酸序列。

SEQ ID No.1：5'-TGCAGAGCTCAATACCAAGATG-3'；

SEQ ID No.2：5'-CATTGCCCTCCTTGTCGAAGAC-3'。

優選地，所述探針包括野生型MYL3的探針和突變型MYL3的探針。