[發明專利]一種檢測MYL3基因突變的引物探針組合物及其應用

在審

• 申請號: 202110402351.5
• 申請日: 2021-04-14
• 公開（公告）號: CN112941173A
• 公開（公告）日: 2021-06-11
• 發明（設計）人: 趙躍;黎江溪
• 申請（專利權）人: 大理大學
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟

1.一種檢測MYL3基因突變的引物探針組合物，其特征在于，所述檢測MYL3基因突變的引物探針組合物包括檢測MYL3基因突變位點c.374AC的實時熒光PCR引物和探針。

2.根據權利要求1所述的檢測MYL3基因突變的引物探針組合物，其特征在于，所述實時熒光PCR引物包括SEQ ID No.1～2所示的核苷酸序列；

優選地，所述探針包括野生型MYL3的探針和突變型MYL3的探針；

優選地，所述野生型MYL3的探針包括SEQ ID No.3所示的核苷酸序列，所述突變型MYL3的探針包括SEQ ID No.4所示的核苷酸序列。

3.根據權利要求1或2所述的檢測MYL3基因突變的引物探針組合物，其特征在于，所述探針為Taqman探針；

優選地，所述Taqman探針的5’端標記有熒光報告基團，3’端標記有淬滅基團；

優選地，所述熒光報告基團包括FAM和/或HEX；

優選地，所述淬滅基團包括MGB；

優選地，所述野生型MYL3的探針的熒光報告基團與所述突變型MYL3的探針的熒光報告基團不同；

優選地，所述野生型MYL3的探針的熒光報告基團包括FAM；

優選地，所述突變型MYL3的探針的熒光報告基團包括HEX。

4.一種檢測MYL3基因突變的試劑盒，其特征在于，所述檢測MYL3基因突變的試劑盒包括權利要求1～3任一項所述的檢測MYL3基因突變的引物探針組合物；

優選地，所述試劑盒還包括PCR反應液和/或染料；

優選地，所述PCR反應液包括DNA聚合酶、Mg²⁺緩沖液、dNTPs和水；

優選地，所述染料包括Rox校正染料。

5.根據權利要求4所述的檢測MYL3基因突變的試劑盒，其特征在于，所述檢測MYL3基因突變的試劑盒還包括質控品；

優選地，所述質控品包括野生型質控品、純合突變型質控品或雜合突變型質控品中的任意一種或至少兩種的組合。

6.一種權利要求4或5所述的檢測MYL3基因突變的試劑盒以非疾病診斷和/或治療為目的的使用方法，其特征在于，所述使用方法包括：

提取待測樣本的基因組，使用所述檢測MYL3基因突變的試劑盒，對所述待測樣本的基因組與質控品一同進行擴增，檢測熒光信號，再進行分析。

7.根據權利要求6所述的使用方法，其特征在于，所述擴增的程序包括：

預變性：93～98℃，20～40s；

循環擴增：93～98℃，3～7s；55～57℃，30～40s；

延伸：70～74℃，1.5～2.5min；

優選地，所述循環擴增的次數為35～45次。

8.根據權利要求6或7所述的使用方法，其特征在于，所述分析包括：

比較所述待測樣本與質控品的熒光信號及散點圖，確定所述待測樣本的基因型。

9.根據權利要求6～8任一項所述的使用方法，其特征在于，所述使用方法包括：

(1)提取待測樣本的基因組；

(2)使用檢測MYL3基因突變的試劑盒，對所述待測樣本的基因組與質控品一同進行擴增，所述擴增的程序包括：

預變性：93～98℃，20～40s；

循環擴增：93～98℃，3～7s；55～57℃，30～40s；

延伸：70～74℃，1.5～2.5min；

所述循環擴增的次數為35～45次；

(3)檢測熒光信號，再進行分析：

比較所述待測樣本與質控品的熒光信號及散點圖，確定所述待測樣本的基因型。

10.權利要求1～3任一項所述的檢測MYL3基因突變的引物探針組合物、權利要求4或5所述的檢測MYL3基因突變的試劑盒或權利要求6～9任一項所述的檢測MYL3基因突變的試劑盒以非疾病診斷和/或治療為目的的使用方法中的任意一種或至少兩種的組合在制備檢測MYL3基因突變的產品中的應用。