[發明專利]一種用于檢測TNNC1基因突變的引物探針組合物及其應用

有效

• 申請號: 202110401301.5
• 申請日: 2021-04-14
• 公開（公告）號: CN112941172B
• 公開（公告）日: 2022-05-31
• 發明（設計）人: 趙躍;張世梅
• 申請（專利權）人: 大理大學
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟

本發明涉及一種用于檢測TNNC1基因突變的引物探針組合物及其應用，所述引物探針組合物包括檢測TNNC1基因突變位點c.19GC的引物和探針，所述引物包括SEQIDNO.1～2所示的核酸序列，所述探針包括野生型探針和突變型探針，所述野生型探針包括SEQIDNO.3所示的核酸序列，所述突變型探針包括SEQIDNO.4所示的核酸序列。所述引物探針組合物具備高特異性和靈敏度，能夠針對TNNC1基因新突變位點c.19GC，利用其進行實時熒光PCR，可實現簡便、快速、準確和經濟地判斷基因型。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及一種用于檢測TNNC1基因突變的引物探針組合物及其應用，具體涉及一種檢測TNNC1基因突變位點c.19GC的引物探針組合物及其應用。

背景技術

肥厚型心肌病(Hypertrophic cardiomyopathy，HCM)是一種常見且復雜的遺傳性心臟疾病，除心臟移植外，目前無有效的治療方法，給家庭及社會造成嚴重的經濟負擔。HCM主要病理特征是左心室、雙心或室間隔不對稱性增厚，正常情況下，心肌細胞規則地組裝成平行排列的直線束肌纖維，但HCM患者的肌纖維短寬肥厚，彌漫性肥大，排列紊亂，能引起其舒張期功能障礙。HCM的發病常以家族集聚性方式出現，其分子遺傳學基礎為基因突變。

肌鈣蛋白位于肌動蛋白絲上，是橫紋肌收縮的中央調節蛋白，包括肌鈣蛋白T2、肌鈣蛋白I3及肌鈣蛋白C1(Cardiac troponin C1，編碼基因為TNNC1)三個亞基。TNNC1基因(GenBank:NG_008963.1)位于3號染色體長臂3p21.1上，全長2951bp，共編碼161個氨基酸，是編碼Ca²⁺誘捕敏感蛋白的最重要基因之一，TNNC1基因結構和功能是否正常，決定著粗細肌絲能否正常滑行。研究表明，TNNC1基因突變后，能增加肌絲對Ca²⁺的誘捕，促使Ca²⁺循環紊亂，產生心肌細胞代償性肥大，最終導致HCM的發生。

對HCM患者進行基因檢測和家族篩查能夠為臨床診斷提供重要的指導作用，主要體現為：(1)產前診斷，指導優生優育；(2)輔助明確診斷，進行臨床干預；(3)家族篩查，進行家族疾病發生風險評估及管理。

目前，遺傳疾病基因突變的檢測方法包括：PCR-RFLP分析、SNP shot多重PCR技術、核酸分子雜交和熒光定量PCR、高分辨率溶解曲線分析、毛細管電泳測序和高通量測序等方法。毛細管電泳技術是基因突變檢測的金標準，但因其對設備的要求高、價格昂貴等缺點，很難從實驗室普及到臨床，而熒光定量PCR具有快速、簡便、經濟和準確等特點。

CN102965428A公開了一種檢測遺傳性心肌肥厚相關基因突變樣品制備試劑盒，針對基因ACTC1、ACTN2、BRAF、CALR3、CASQ2、CSRP3、GLA、HRAS、JPH2、KRAS、LAMP2、LDB3、MAP2K1、MYBPC3、MYH6、MYH7、MYL2、MYL3、MYLK2、MYOZ2、PRKAG2、RAF1、SOS1、TCAP、TNNC1、TNNI3、TNNT2、TPM1、TTN、TTR和VCL全部外顯子片段，但依賴大規模基因測序平臺，過程十分繁瑣，耗時較長，且價格十分昂貴。

綜上所述，導致HCM發病的突變位點較多，早期分子檢測和預防尤為關鍵，因此，建立一種簡便、快速、經濟和準確的突變篩查方法，對于HCM的預防、輔助臨床診斷和預后評估具有重要意義。

發明內容

針對現有技術的不足和實際需求，本發明提供一種用于檢測TNNC1基因突變的引物探針組合物及其應用，利用所述引物探針組合物進行實時熒光PCR，根據熒光信號結果即可判斷突變基因型，便捷且經濟，對于HCM的預防、輔助臨床診斷和預后評估具有重要意義。

為達上述目的，本發明采用以下技術方案：