[發明專利]一種高效液相質譜聯用測定血漿中利福平的方法

在審

• 申請號: 202110401110.9
• 申請日: 2021-04-14
• 公開（公告）號: CN113109493A
• 公開（公告）日: 2021-07-13
• 發明（設計）人: 郭德應;陶春蕾;許楊;曾虹;湯阿逞
• 申請（專利權）人: 安徽萬邦醫藥科技股份有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/06
• 代理公司: 合肥律眾知識產權代理有限公司 34147
• 代理人: 趙娟

本發明公開了一種高效液相質譜聯用測定血漿中利福平的方法，該方法采用液質聯用系統測定，先取待測樣品，加入一定量的混合有機溶劑進行蛋白沉淀，離心后進行上清液的稀釋，預處理后，取適量測試樣品注入高效液相色譜?串聯質譜儀中，測試樣品中的利福平和內標利福平?d3的色譜峰，并計算所述血漿樣品中的利福平的濃度。本發明方法快速、準確、靈敏度高、操作簡便，為利福平的血藥濃度測定提供依據；并且本發明預處理方法簡便，適用于常規測定。

技術領域

本發明涉及血漿中利福平測定技術領域，尤其涉及是一種高效液相質譜聯用測定血漿中利福平的方法。

背景技術

利福平是一種所屬利福霉素家族的一種廣譜抗生素藥物，對結核桿菌有較強抗菌作用，對革蘭氏陽性或陰性細菌、病毒等也有療效。為紅色或暗紅色的結晶狀粉末，不溶于水。一般為膠囊或者片劑口服藥，與其他抗結核藥合用起協同作用，并延緩耐藥菌株產生。主要用于治療結核病、腦膜炎和金黃色葡萄球菌感染。因此，利福平制劑的藥用經濟性高，具有廣闊的市場前景。人體服用利福平后，由于藥物的相互作用，關注人體血漿中利福平濃度是非常有必要的。

然而，目前關于血漿中利福平的高效液相質譜檢測方法未見報道，現有的利福平檢測方法并不能滿足其檢測需求。因此建立一種穩定、可靠、準確、快速的血漿中利福平測定方法具有重要的現實意義。

發明內容

針對現有技術存在的問題，本發明提出的一種高效液相質譜聯用測定血漿中利福平的方法可提高血漿中利福平檢測的速度、精度和靈敏度。該方法血漿樣品經預處理后經高效液相色譜-串聯質譜檢測其濃度，具體方法包括以下步驟：

S1，血漿樣品預處理：

以K2-EDTA為抗凝劑，以利福平-d3為內標；于96深孔板中精密加入50μL的血漿樣品，加入50μL的1μg/mL的內標利福平-d3溶液，混勻后加入200μL有機溶劑甲醇于96深孔板中，渦旋混合；于4℃以4200rpm離心10min，取上層清液50μL至裝有300μL混合有機溶劑(混合有機溶劑為甲醇)的96深孔板中；水按照體積比50：50混合得到的混合物，渦旋混勻；于4℃以4200rpm離心10min后作為測試樣品待檢測；以上過程中除了離心均需于室溫黃光條件下操作。

S2，液相色譜條件：

WelchΜltimate XB-C18，5μm，柱規格為2.1x 100mm；色譜柱溫：40℃；流動相A：水/甲酸的體積百分比為100/0.1；流動相B：乙腈；洗液：乙腈/水/甲酸的體積百分比為80/20/0.1；自動進樣器溫度為4℃；梯度洗脫，流速為0.5mL/min，進樣量為5μL，分析時間4.0min。

進一步地，所述梯度洗脫選用二元高壓梯度洗脫，所述二元高壓梯度洗脫程序為：

S3，質譜條件：

離子源為電噴霧離子源，接口電壓為4KV，接口溫度為300℃，DL溫度為250℃，加熱塊溫度為400℃，霧化氣流量為3L/min，干燥氣流量為10L/min，加熱氣流量為10L/min，去簇電壓分別為-18eV的利福平和-27eV的利福平-d3；Q1 Pre偏差分別為-24V的利福平和-24V的利福平-d3；Q3 Pre偏差分別為-40V的利福平和-28V的利福平-d3；正離子方式檢測；掃描方式為多重反應監測。

S4，高效液相色譜-串聯質譜儀測定：

取適量測試樣品注入高效液相色譜-串聯質譜儀中，測試樣品中的利福平和內標利福平-d3的色譜峰，并計算所述血漿樣品中的利福平的濃度。

其中，用于定量分析的離子反應分別為：m/z 823.3→791.30，其為利福平；m/z826.10→402.10，其為利福平-d3。