[發明專利]一種提取兒茶素的方法及其應用

在審

• 申請號: 202110394499.9
• 申請日: 2021-04-13
• 公開（公告）號: CN113105427A
• 公開（公告）日: 2021-07-13
• 發明（設計）人: 張昱
• 申請（專利權）人: 北京杰森源生物科技有限責任公司
• 主分類號: C07D311/62
• 分類號: C07D311/62;A61P39/06;A61P31/12
• 代理公司: 北京隆達恒晟知識產權代理有限公司 11899
• 代理人: 楊青

本發明涉及一種提取兒茶素的方法及其應用，采用粉碎機將茶樹的植物組織磨碎，加水浸泡，超聲波處理，加入復合酶溶液；取酶解產物加入溶媒進行提取，提取物粗品離心，取上清液，加入萃取劑進行萃取，提取粗液進行柱層析分離制得初級結晶物；用結晶液進行重結晶，制得兒茶素。本發明提取過程中加入異煙酸有效提高兒茶素的穩定度，且能最大程度地降低兒茶素的氧化損失，同時能改善兒茶素受熱降解的情況；采用纖維素酶、木聚糖酶、葡萄糖苷酶的復合酶溶液體系使得細胞壁破壞更為充分，能有效減少細胞內物質向外溶出的阻力。

技術領域

本發明屬于天然植物提取技術領域，具體涉及一種提取兒茶素的方法及其應用。

背景技術

兒茶素又稱茶單寧，和咖啡因同屬茶葉中的兩大重要機能性成分，占茶多酚總量65％～80％，兒茶素類屬于多元酚類中的一種，又稱黃烷醇類。兒茶素對人類健康有著積極的作用，兒茶素包括酯型兒茶素和簡單兒茶素，其主要成分有：EGCG(epigallocatechingallate)，EGC(epigallocatechin)，ECG(epicatechingallate)，EC(epicatechin)和catchin。主要包括酯型兒茶素和非酯型兒茶素，酯型兒茶素是茶鮮葉茶多酚中主要的活性和水溶性成份，是兒茶素中含量最高的組分，占兒茶素的70％左右，其中有兩個主要的成分：L-表型沒食子酸兒茶素沒食子酸酯(L-EGCG)和L-表型兒茶素沒食子酸酯(L-ECG)。酯型兒茶素是茶鮮葉中最有效的抗氧化多酚，具有抗氧化、抗癌、抗突變等活性。抗氧化活性至少是維生素C的100多倍，是維生素E的25倍，能夠保護細胞和DNA受損害，這種損害相信與癌癥、心臟疾病和其他重大疾病有關，酯型兒茶素的這些功效歸結于他們對氧自由基的清除(抗氧化)能力。因此，酯型兒茶素又被認定是兒茶素中活性最大的一種單體，也是茶鮮葉的主要活性成分。

現有技術中，EGCG經生物轉化可提高其生物利用度和生物活性。目前對EGCG生物轉化研究最多的為腸道菌群，Roowi發現了EGCG在小鼠的腸道環境中轉化為EGC和GA，隨后EGC進一步轉化為其它小分子物質，這些小分子物質則更容易被小腸吸收。Takagaki等人發現EGCG和EGC經小鼠腸道菌群作用后生成多種轉化產物，這些轉化產物的抗腫瘤活性則明顯提高，但是腸道菌群體外代謝的研究非常復雜。真菌微生物介導EGCG生物轉化的研究受到了非常廣泛的關注，真菌微生物擁有豐富酶系，為探究體外生物轉化提供了便利條件。ZL201510085412.4公開了一種黑曲霉介導EGCG生產表沒食子兒茶素和沒食子酸方法，然而該方法采用的生物轉化營養液成分復雜，在實際生產中成本較高，而且會對后期兒茶素的分離純化造成影響；此外，該方法僅針對EGCG轉化成EGC和GA，并沒有涉及EGC和GA進一步轉化，且未涉及其他的兒茶素的生物轉化，具有一定的局限性。

目前主要是從茶葉中提取兒茶素，對茶樹的其他植物組織中含有的兒茶素提取的研究并沒有。

關于兒茶素和表兒茶素代謝物僅有非常少數據，根據增加方法的區域選擇性，制備兒茶素和表兒茶素結合物的不同可用方法可以分別分為三類：(i)直接衍生化；(ii)半-合成或“雜交”方法，和(iii)全合成。Gonzalez-Manzano,S.等人在J.Agric.FoodChem.2009,57(4),1231-1238的工作證明了直接衍生化法。它涉及用過量結合試劑非選擇性處理可商購獲得的表兒茶素，隨后通過制備HPLC技術分級獲得的區域異構的混合物。優化的方法提供制備的在3’或4’位結合的兒茶素硫酸酯、葡糖苷酸(glucuronides)和甲基醚，以及通過半制備HPLC進一步分離在5或7位的硫酸酯。