[發(fā)明專利]一種重組新城疫病毒rNDV-VEGF-Trap、其基因組、制備方法及其用途

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110393844.7
• 申請日: 2021-04-13
• 公開（公告）號: CN115197948A
• 公開（公告）日: 2022-10-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 肖偉;李德山;劉天艷;王振中;曹玉凱;劉芝航
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇康緣瑞翱生物醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號: C12N15/45
• 分類號: C12N15/45;C12N15/12;C12N7/01;C12N15/85;A61K35/768;A61K38/18;A61P35/00;A61P35/02;C12R1/93
• 代理公司: 北京信慧永光知識產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11290
• 代理人: 董世豪;張淑珍

本申請公開了一種重組的新城疫病毒基因組、包含該基因組的重組新城疫病毒rNDV?VEGF?Trap及其制備方法、編碼上述的重組的新城疫病毒基因組的DNA分子以及它們在制備用于治療癌癥的藥物中的用途。本申請所述的重組新城疫病毒涉及將VEGF?Trap的編碼基因插入其基因組中，由此得到的重組新城疫病毒以較強(qiáng)的復(fù)制能力進(jìn)行復(fù)制從而殺死宿主癌細(xì)胞，同時(shí)對非癌細(xì)胞具有可靠的安全性，并且表現(xiàn)出提高的抗腫瘤作用和溶瘤效率。

技術(shù)領(lǐng)域

本申請屬于癌癥治療用溶瘤病毒領(lǐng)域，具體而言，涉及一種重組的新城疫病毒基因組、包含該基因組的重組新城疫病毒及其制備方法、編碼上述的重組的新城疫病毒基因組的DNA分子以及它們的用途。

背景技術(shù)

癌癥是由于機(jī)體細(xì)胞失去正常調(diào)控、過度增殖而引起的疾病，目前已成為影響健康的第一殺手。我國是癌癥尤其是肺癌、胃癌、肝癌及直腸癌高發(fā)區(qū)。據(jù)統(tǒng)計(jì)，僅2016年一年全國新增各類癌癥患者480萬例，230萬病人死于各種癌癥。隨著技術(shù)進(jìn)步，各種新的治療手段尤其是生物藥物治療不斷投入臨床使用。但藥物的安全性、有效性及病人的生活質(zhì)量等方面的需求遠(yuǎn)未得以滿足。發(fā)展新藥或治療手段勢在必行。

1991年，Martuza等人在《Science》雜志發(fā)表文章，證明轉(zhuǎn)基因單純皰疹病毒在惡性膠質(zhì)瘤治療中有一定的效果。至此以后，發(fā)展溶瘤病毒治療癌癥就日益受到關(guān)注。溶瘤病毒治療癌癥的原理是通過對自然界存在的一些致病力較弱的病毒進(jìn)行基因改造，讓其選擇性地感染腫瘤細(xì)胞、在細(xì)胞內(nèi)大量復(fù)制并最終摧毀腫瘤細(xì)胞。同時(shí)它還能激發(fā)免疫反應(yīng)，吸引免疫細(xì)胞來繼續(xù)殺死殘余癌細(xì)胞或通過免疫反應(yīng)殺滅已遷移的癌細(xì)胞。近幾十年來，溶瘤病毒相關(guān)研究取得了巨大進(jìn)展。人們先后用新城疫病毒(Newcastle disease virus，NDV)、1型單純皰疹病毒(HSV-1)、呼腸孤病毒(reovirus)、溶瘤腺病毒(oncolyticadenovirus)來開發(fā)溶瘤病毒，但臨床表現(xiàn)都遠(yuǎn)低于預(yù)期。例如，2005年CFDA批準(zhǔn)了溶瘤腺病毒產(chǎn)品H101上市，然而其治療效果并不理想。

NDV是一種具有負(fù)義單鏈RNA基因組的禽副粘病毒，它一直是癌癥治療的有希望的方法。但NDV作為單一藥物治療的效果有限，一方面，人體抗病毒免疫反應(yīng)能夠清除病毒，另一方面，人體能夠產(chǎn)生中和抗體來抵抗病毒發(fā)揮作用。為了提高NDV在癌癥中的治療效率，這些病毒隨后用來傳遞具有抗腫瘤活性的基因，以進(jìn)一步增強(qiáng)活性。這樣的基因包括編碼細(xì)胞因子或其受體、免疫檢查點(diǎn)分子、腫瘤抑制蛋白或免疫刺激蛋白的基因。

此前，本領(lǐng)域已對在其基因組中整合有編碼細(xì)胞因子或其受體的基因的重組新城疫病毒進(jìn)行了眾多研究，但仍未取得臨床上有益的進(jìn)展。例如，Pascal Buijs等(Recombinant Immunomodulating Lentogenic or Mesogenic Oncolytic NewcastleDisease Virus for Treatment ofPancreatic Adenocarcinoma，Viruses 2015，7，2980-2998)研究了表達(dá)干擾素或干擾素拮抗蛋白的重組新城疫病毒。

研究表明血管生成是腫瘤治療的重要靶標(biāo)。血管生成是從現(xiàn)有的內(nèi)皮細(xì)胞中生成新的血管，進(jìn)而向各種器官提供充足氧氣和營養(yǎng)的過程，其對于腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移至關(guān)重要，抗血管生成療法是癌癥治療的重要方法之一。在腫瘤新生血管形成過程中，支持腫瘤生長的促血管生成因子主要有：血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)、血小板源性生長因子(PDGF)、表皮生長因子(EGF)、血管生成蛋白(angiogenin)和轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-β)等，這些因子通過與相應(yīng)的受體結(jié)合，激活下游信號通路，從而調(diào)控腫瘤新血管的生成。