[發明專利]一種重組新城疫病毒rNDV-VEGF-Trap、其基因組、制備方法及其用途

在審

• 申請號: 202110393844.7
• 申請日: 2021-04-13
• 公開（公告）號: CN115197948A
• 公開（公告）日: 2022-10-18
• 發明（設計）人: 肖偉;李德山;劉天艷;王振中;曹玉凱;劉芝航
• 申請（專利權）人: 江蘇康緣瑞翱生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12N15/45
• 分類號: C12N15/45;C12N15/12;C12N7/01;C12N15/85;A61K35/768;A61K38/18;A61P35/00;A61P35/02;C12R1/93
• 代理公司: 北京信慧永光知識產權代理有限責任公司 11290
• 代理人: 董世豪;張淑珍

1.一種重組的新城疫病毒基因組，其中，所述基因組包括VEGF-Trap的編碼基因，所述VEGF-Trap的編碼基因位于新城疫病毒基因組的P基因與M基因之間。

2.如權利要求1所述的重組的新城疫病毒基因組，其中，所述VEGF-Trap的編碼基因處于DNA或RNA的形式；

優選地，所述VEGF-Trap的編碼基因具有如SEQ ID NO.1所示的序列或與其具有至少80％同一性的序列。

3.如權利要求1或2所述的重組的新城疫病毒基因組，其中，所述重組的新城疫病毒基因組的序列以SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.5示出。

4.一種重組新城疫病毒，其中，所述病毒包含權利要求1-3中任一項所述的重組的新城疫病毒基因組。

5.如權利要求4所述的重組新城疫病毒，其中，所述新城疫病毒的出發毒株選自：弱毒株LaSota、Hitchner B1、V4，中毒株Mukteswar、Anhinga，強毒株F48E9、JS/7/05/Ch、Italien、Herts/33、NDV-BJ；以及基于所述出發毒株以基因工程手段構建的任意的嵌合毒株。

6.一種編碼權利要求1-3中任一項所述的重組的新城疫病毒基因組的DNA分子。

7.一種藥物組合物，其中，所述藥物組合物包含權利要求1-3中任一項所述的重組的新城疫病毒基因組、權利要求4或5所述的重組新城疫病毒和/或權利要求6所述的DNA分子；

優選地，所述藥物組合物進一步包含藥學上可接受的輔料；

優選地，所述藥學上可接受的藥用輔料選自溶劑、拋射劑、增溶劑、助溶劑、乳化劑、著色劑、崩解劑、填充劑、潤滑劑、潤濕劑、滲透壓調節劑、穩定劑、助流劑、矯味劑、防腐劑、助懸劑、抗氧劑、滲透促進劑、pH值調節劑、表面活性劑或稀釋劑。

8.一種制備權利要求4或5所述的重組新城疫病毒的方法，其中，所述方法包括：

(1)將含有VEGF-Trap的編碼基因的DNA序列的克隆載體與NDV病毒載體分別進行酶切，并將酶切得到的所述VEGF-Trap的編碼基因的DNA序列與所述NDV病毒載體進行連接，得到重組新城疫病毒質粒；

(2)將所述重組新城疫病毒質粒轉染至細胞中并對經轉染的細胞進行培養，獲得所述重組新城疫病毒。

9.如權利要求8所述的方法，其中，采用選自如下的載體構建所述克隆載體：PUC57載體、pMD18-T載體、pMD19-T載體、pBlueScript SK(+/-)載體、pBluescript II KS(+/-)；

優選地，所述NDV病毒載體為選自如下的NDV病毒的基因組的全長cDNA序列：弱毒株LaSota、Hitchner B1、V4，中毒株Mukteswar、Anhinga，強毒株F48E9、JS/7/05/Ch、Italien、Herts/33、NDV-BJ；

優選地，所述NDV病毒載體為pBluescript II KS(+/-)-NDV(pBrNDV)、pCI-neo-NDV、pOLTV5-NDV載體；

優選地，將所述重組新城疫病毒質粒與選自如下的輔助質粒共轉染至所述細胞中：pTM-NP、pTM-P和pTM-L；pCI-neo-NP、pCI-neo-P和pCI-neo-L；或者pBluescript II KS(+/-)-NP、pBluescript II KS(+/-)-P和pBluescript II KS(+/-)-L；

優選地，所述細胞選自BHK-21細胞、BSR-T7/5細胞、VERO細胞、DF-1細胞、293細胞或MDCK細胞。

10.權利要求1-3中任一項所述的重組的新城疫病毒基因組、權利要求4或5所述的重組新城疫病毒、權利要求6所述的DNA分子和/或權利要求7所述的藥物組合物在制備用于治療或改善癌癥的藥物中的用途；

優選地，所述癌癥選自：結腸癌、肝癌、肺癌、胃癌、直腸癌、白血病、淋巴瘤、卵巢癌、乳腺癌、子宮內膜癌、膀胱癌、尿路上皮癌、支氣管癌、骨癌、前列腺癌、胰腺癌、膽囊癌、膽管癌、食道癌、腎細胞癌、甲狀腺癌、頭頸癌、睪丸癌、內分泌腺癌、腎上腺癌、腦下垂體癌、皮膚癌、軟組織癌、血管癌、腦癌、神經癌、眼癌、腦膜癌、口咽癌、下咽部癌、宮頸癌、肌肉瘤、子宮癌、成膠質細胞瘤、成神經管細胞瘤、神經母細胞瘤、腎癌、星形細胞瘤、膠質瘤、腦膜瘤、胃泌素瘤、成神經細胞瘤、黑色素瘤、急性髓系白血病、骨髓增生異常綜合征或肉瘤。