[發明專利]一種用于分析PCB95及其代謝物在雞肝微粒體中代謝行為的方法

有效

• 申請號: 202110393679.5
• 申請日: 2021-04-13
• 公開（公告）號: CN113063875B
• 公開（公告）日: 2022-10-28
• 發明（設計）人: 邱靜;廖光琴;張崴
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院農業質量標準與檢測技術研究所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/70
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 王煥

本發明提供了一種用于分析PCB95及其代謝物在雞肝微粒體中代謝行為的方法，涉及環境毒理學技術領域。所述方法包括以下步驟：(a)建立雞肝微粒體孵育體系；(b)將不同濃度的PCB95及其代謝物在雞肝微粒體孵育液中孵育代謝；(c)以氣相色譜儀和電子捕獲檢測器測定孵育液中PCB95及其代謝物的含量；(d)根據定量結果，分析評價PCB95及其代謝物在雞肝微粒體中的特征代謝行為和毒性差異。該方法可以同時分析PCB95及其代謝物在雞肝微粒體中代謝情況，操作簡單、分析速度快。

技術領域

本發明涉及環境毒理學技術領域，尤其是涉及一種用于分析PCB95及其代謝物在雞肝微粒體中代謝行為的方法。

背景技術

多氯聯苯(Polychlorinated biphenyls，簡稱PCBs)是由聯苯多次氯化而成的持久性有機污染物，已在生物體和自然環境中檢出，且能對生物體產生一系列不良影響，包括導致癌癥以及對神經、生殖、內分泌等系統造成不良影響。因此在20世紀70年代末PCBs就已經被禁止工業生產，但是其仍以工業副產品的方式存在于環境中。不僅如此，由于PCBs具有生物蓄積性，能在生物體中代謝成羥基代謝物、甲氧基代謝物和甲磺基代謝物，其中羥基代謝物為主要產物。

我國是全球最大的雞蛋生產和消費國，雞蛋中PCBs殘留檢出已有不少報道，這是人群攝入PCBs的一個不容小覷的來源，說明PCBs在蛋雞中具有蓄積、代謝和遷移性，且研究發現雞對多氯聯苯較敏感。但目前研究主要停留在通過鼠、狗、兔等微粒體對PCB95的分布和代謝物的鑒定，同時對PCB95及其代謝物在雞中的代謝動態鮮有研究，而在雞肝微粒體中的研究甚至沒有相關報道。

鑒于此，該發明擬提供一種高效可行的方法解決上述問題。

發明內容

本發明的目的在于提供一種用于分析PCB95及其代謝物在雞肝微粒體中代謝行為的方法。該方法可以同時分析PCB95及其代謝物在雞肝微粒體中代謝情況，操作簡單、分析速度快。

為實現上述目的，本發明提供的技術方案如下：

一種用于分析PCB95及其代謝物在雞肝微粒體中代謝行為的方法，所述方法包括以下步驟：

(a)建立雞肝微粒體孵育體系；

(b)將不同濃度的PCB95及其代謝物在雞肝微粒體孵育液中孵育代謝；

(c)以氣相色譜儀和電子捕獲檢測器測定孵育液中PCB95及其代謝物的含量；

(d)根據定量結果，分析評價PCB95及其代謝物在雞肝微粒體中的特征代謝行為和毒性差異。

在一個實施方案中，所述代謝物包括4-OH-PCB95和4-MeO-PCB95。

在一個實施方案中，步驟(a)中，所述孵育體系中，雞肝微粒體蛋白濃度范圍為0.1～0.5mg/mL；優選0.1mg/mL。

在一個實施方案中，步驟(a)的孵育體系中含有孵育緩沖液；優選地，將所述雞肝微粒體與所述孵育緩沖液混勻后，置于水浴中震蕩預孵育5-8min。

在一個具體的實施方案中，步驟(a)建立雞肝微粒體孵育體系包括在冰浴中依次加入雞肝微粒體、pH 7.4Tris-HCl孵育緩沖溶液(含50mmol Tris-HCl、1mmol NADPH-Na4、5mmol MgCl₂)于培養瓶中，孵育液總體積為200μL并混勻，置37℃水浴震蕩預孵育5min。

在一個實施方案中，步驟(b)中，PCB95的孵育濃度范圍為0～144.26μg/mL，4-OH-PCB95的孵育濃度范圍為0～11.132μg/mL，4-MeO-PCB95的孵育濃度范圍為0～55.36μg/mL。