[發明專利]一種檢測EGFR基因L858R和Del E746-A750突變的試劑及其應用

在審

• 申請號: 202110393501.0
• 申請日: 2021-04-13
• 公開（公告）號: CN113088573A
• 公開（公告）日: 2021-07-09
• 發明（設計）人: 黃文靜;袁夢兮;聶秋宇;朱碧銀;王曉鋒;趙鑫;王益民
• 申請（專利權）人: 人和未來生物科技（長沙）有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6851
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 肖云

本發明公開了一種檢測EGFR基因L858R和Del E746?A750突變的試劑及其應用，所述試劑包括序列如SEQ ID No.1及SEQ ID No.3所示的第一引物對及序列如SEQ IDNo.4及SEQ ID No.5所示的第二引物對。通過本發明方案的制備的試劑對L858R和DelE746?A750基因突變進行檢測，特異性高，靈敏度高，同時減少了野生型背景對檢測結果的干擾，時間短，成本低。

技術領域

本發明屬于生物技術及醫學領域，具體涉及一種檢測EGFR基因L858R和Del E746-A750突變的試劑及其應用。

背景技術

表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor，EGFR)基因位于人類7號染色體短臂上，有28個外顯子。EGFR編碼蛋白是一種跨膜糖蛋白，該蛋白是由1186個氨基酸組成，具有絡氨酸激酶(tyrosine kinase，TK)活性，廣泛分布于哺乳動物上皮細胞、成纖維細胞、膠質細胞和角細胞等細胞表面。正常情況下，作為細胞表面蛋白可與配體如表皮生長因子EGF(epidermal growth factor)結合，EGFR可被激活，由單體轉化為二聚體以及發生自體絡氨酸磷酸化，激活后的EGFR可以再磷酸化下游蛋白，對細胞的生長、增殖和分化等生理生化過程起著重要的調控作用。然而，當EGFR基因發生突變，EGFR基因就會過量表達EGFR蛋白并組裝到細胞膜表面，導致表皮生長因子受體過多，EGF與EGFR的過多結合，導致細胞發生異常生長和分裂，最終發生癌變。

EGFR基因突變主要發生在TK區域的前四個外顯子上面，一般突變有三種類型，分別是缺失突變、替代突變、復制或插入突變。其中，缺失突變主要發生在外顯子19上，最常見的是del E746-A750，替代突變主要發生在外顯子21上的L858R，這兩種突變約占突變的90％，所以對于EGFR基因的突變研究，這兩者突變的檢測至關重要。對于腫瘤患者的腫瘤基因獲取一般來源于組織樣本，但是晚期的肺癌患者組織樣本不易獲取。相關研究發現，在肺癌患者晚期的外周血中發現有來自于腫瘤組織的游離DNA，所以，可以通過對外周血進行EGFR基因的突變檢測。EGFR的突變檢測目的主要是為了根據患者的自身情況進行個性化治療，達到最大的治療效果。

目前對EGFR突變檢測手段主要包括測序法與ARMS方法。相關文獻報道比較了兩種方法的優缺點，測序法的靈敏度低，大約為25％，同時該方法的檢測流程復雜、速度慢，同時對分析要求高，儀器成本高，檢測試劑成本相對來說低；ARMS方法的靈敏度較高為1％，其檢測流程簡單，速度快，數據分析要求低，儀器成本低，但是ARMS檢測的費用成本高，是由于該方法檢測使用的探針需要進行熒光修飾，修飾的費用平均為300元人民幣/條，平均一個位點單次反應檢測成本需要20元人民幣。

發明內容

本發明旨在至少解決上述現有技術中存在的技術問題之一。為此，本發明提出一種檢測EGFR基因L858R和Del E746-A750突變的試劑，能夠準確、快速、低成本的檢測表皮生長因子受體基因的突變率。

本發明還提出上述試劑的應用。

本發明還提出一種檢測EGFR基因L858R和Del E746-A750突變的試劑盒。

本發明還提出上述試劑盒的應用。

本發明還提出一種檢測EGFR基因L858R和Del E746-A750突變的方法。

根據本發明的一個方面，提出了一種檢測EGFR基因L858R和Del E746-A750突變的試劑，所述試劑包括序列如SEQ ID No.1及SEQ ID No.3所示的第一引物對及序列如SEQ IDNo.4及SEQ ID No.5所示的第二引物對。

在本發明的一些實施方式中，所述所述試劑還包括序列如SEQ ID No.6所示的第一熒光探針和SEQ ID No.7所示的第一猝滅探針和序列如SEQ ID No.8所示的第二熒光探針和SEQ ID No.9所示的第二猝滅探針。