[發明專利]一種過表達/敲低CSE基因的方法及其在治療人鼻咽癌中的應用

在審

• 申請號: 202110393452.0
• 申請日: 2021-04-13
• 公開（公告）號: CN113174404A
• 公開（公告）日: 2021-07-27
• 發明（設計）人: 吳東棟;張倩倩;祁慧雯;王迪;王怡禛;敬米蓉;張艷霞;蔡春波;高熒苒;李彥章;姬新穎
• 申請（專利權）人: 河南大學
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N15/60;C12N5/10;A61K48/00;A61P35/00
• 代理公司: 北京興智翔達知識產權代理有限公司 11768
• 代理人: 呂洪

本發明公開了一種過表達/敲低CSE基因的方法及其在治療人鼻咽癌中的應用，包括如下步驟：將CSE基因穩定敲低及穩定過表達人CSE基因質粒轉染人鼻咽癌細胞，通過G418和嘌呤霉素篩選，最終得到穩定敲低和過表達CSE基因的人鼻咽癌細胞。制備一種敲低CSE的藥物用于人鼻咽癌治療時，可促進腫瘤細胞凋亡，抑制腫瘤細胞生長。

技術領域

本發明涉及生物制藥技術領域，特別涉及一種過表達/敲低CSE基因的方法及其在治療人鼻咽癌中的應用。

背景技術

鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma,NPC)是頭頸部惡性腫瘤之一，全球范圍內地理分布存在異常偏向性，主要發生在亞洲東南部地區。主要發病機制包括遺傳、環境和EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)感染等因素。在實際的臨床治療中，鼻咽癌主要是通過放化射療和手術的方式進行干預，因其易復發且早期可發生轉移，治療效果并不理想。鼻咽癌的發生部位比較特殊，好發于多種混合的分層鱗狀上皮和纖毛上皮存在的鼻咽腔頂部和側壁，是耳鼻咽喉部及頭頸部的惡性腫瘤之一，約占頭頸部惡性腫瘤的78％，除了其遺傳，環境和EBV感染因素外，還存在位于6p21號染色體MHC區的HLA基因座和鄰近的易感基因，及在早些期間發現的飲食習慣，比如使用腌制食品可能導致其發病。在高危人群中，鼻咽癌的發病高峰在45至54歲之間，且男性患病率高于女性。鼻咽癌存在兩類三種組織學亞型：鱗狀細胞癌、非角化鱗狀細胞癌；我國南方地區99％是非角化癌，也因其缺乏角化功能，普遍存在EBV感染。在對鼻咽癌進行分期和治療中，MRI、CT和PET/CT是目前臨床上較為常用的影像診斷方式。最近，臨床開始使用全身檢測18F-FDG-PET/MRI，對原發性鼻咽癌進行評估分期，顯示出比單獨的MRI更高的準確性；還可用PET/CT進行單步分期模式，再結合1F-FDG-PET參數和EBV DNA就對可以對鼻咽癌進行分期，其優于之前常用的TNM分期法。在對鼻咽癌的預后方面，MRI的放射線照相列線圖已展現出它超前的能力；這些新興的放射學方法主要是用轉換醫學圖像成高維和定量影像學功能來幫助腫瘤學的進一步決策，既可以減輕經濟負擔，非侵入性的檢查手段也更容易被病人接受。鼻咽癌的臨床治療主要是手術治療、術后放化療及單獨使用放化療；近些年新型技術和后期輔助治療在其治療上得到了極大的推廣，但其復發率和遠處轉移率仍威脅著患者的健康。早發現早診斷早治療，對于腫瘤患者來說其預后就越好。在臨床治療過程中，精準治療是最近幾年的熱點，其中腫瘤的靶向治療應用最為廣泛；科研工作者對癌癥DNA、RNA及微環境的研究也越來越深入，發現了新的腫瘤標志物，為早發現早診斷早治療提供了無限的可能性。所以探究鼻咽癌的發生發展機制對腫瘤分子靶向設計及精準防治至關重要。因此，尋找鼻咽癌的發生發展機制、治療靶點及表面標志物等進行更加針對性的靶向精準治療就成為了當前最主要的目的。

硫化氫(Hydrogen sulfide，H₂S)是一種具有臭雞蛋氣味的水溶性氣體。過去幾十年，由于其能抑制線粒體中的硫化氫呼吸復合物，導致細胞無法利用氧氣進行氧化代謝，H₂S一直被人們認為是不利于人體的。近年來，越來越多的證據表明硫化氫參與了不同的生理和病理生理過程，其中包括高血壓，神經退行性變，炎癥和代謝綜合征等的發生發展。同樣，H₂S對腫瘤的發生發展有著密切關系，在腫瘤治療的精準治療過程中可能是一個新的分子靶點。現有研究結果顯示硫化氫在腫瘤中存在抑制作用，也有促進作用，這種現象可能與硫化氫濃度和作用時間有關，研究表明低濃度可產生促進作用，高濃度則出現抑制作用。在不同腫瘤中，三種硫化氫合成酶的表達情況也不盡不同，不同的酶對腫瘤產生不同的影響。目前國內外還未報道出H₂S與鼻咽癌相關的研究，為了解內源性硫化氫合成酶胱硫醚-γ-裂合酶(Cystathionine-γ-lyase,CSE)在人鼻咽癌細胞中的進展及轉歸的作用，我們通過體內外實驗探究過表達/敲低CSE后對人鼻咽癌細胞生長及凋亡的影響。