[發明專利]一種牛源致病性蠟樣芽孢桿菌間接ELISA檢測試劑盒在審
| 申請號： | 202110391995.9 | 申請日： | 2021-04-13 |
| 公開（公告）號： | CN112986560A | 公開（公告）日： | 2021-06-18 |
| 發明（設計）人： | 王學理;何云江;郗珊珊;孟慶磊;陳云嬌 | 申請（專利權）人： | 內蒙古民族大學 |
| 主分類號： | G01N33/569 | 分類號： | G01N33/569;G01N33/543;G01N33/68;C12N1/20;C12R1/085 |
| 代理公司： | 北京中政聯科專利代理事務所(普通合伙) 11489 | 代理人： | 陳強 |
| 地址： | 028000 內蒙古自治*** | 國省代碼： | 內蒙古;15 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 種牛 致病性 芽孢 桿菌 間接 elisa 檢測 試劑盒 | ||
1.一種牛源致病性蠟樣芽孢桿菌間接ELISA檢測試劑盒，其特征在于：所述間接ELISA檢測試劑盒以牛源致病性蠟樣芽孢桿菌菌懸液為包被抗原。
2.根據權利要求1所述牛源致病性蠟樣芽孢桿菌間接ELISA檢測試劑盒，其特征在于：所述牛源致病性蠟樣芽孢桿菌菌懸液由如下方法制備而成：將牛源致病性蠟樣芽孢桿菌劃線接種于普通瓊脂培養基上，37℃過夜培養，挑取單個菌落接種到LB液體培養基，37℃培養12-24h后；將培養得到的蠟樣芽孢桿菌培養物離心，收集菌體，洗滌，用碳酸鹽緩沖液重懸菌體，制成蠟樣芽孢桿菌菌懸液。
3.根據權利要求2所述牛源致病性蠟樣芽孢桿菌間接ELISA檢測試劑盒，其特征在于：所述普通瓊脂培養基由以下重量的原料及方法制成：蛋白胨10g、瓊脂14g、氯化鈉5g、牛肉浸出粉3g、蒸餾水1000ml，加熱煮沸溶解，分裝，121℃高壓滅菌15分鐘備用。
4.根據權利要求2所述牛源致病性蠟樣芽孢桿菌間接ELISA檢測試劑盒，其特征在于：所述LB液體培養基原料及制備方法為:蛋白胨10g、酵母浸粉5g、氯化鈉5g、葡萄糖2-3g、蒸餾水1000ml，調PH至7.2-7.4，加熱煮沸溶解，分裝，121℃高壓滅菌15分鐘備用。
5.根據權利要求1所述牛源致病性蠟樣芽孢桿菌間接ELISA檢測試劑盒，其特征在于：所述間接ELISA檢測試劑盒還包括：酶標板、封閉液、牛源致病性蠟樣芽孢桿菌陽性血清、牛源致病性蠟樣芽孢桿菌陰性血清、酶標二抗、底物顯色液和終止液。
6.根據權利要求1所述牛源致病性蠟樣芽孢桿菌間接ELISA檢測試劑盒，其特征在于：述封閉液為5％脫脂奶粉；所述酶標二抗為HRP-羊抗牛Ig。
7.根據權利要求1所述牛源致病性蠟樣芽孢桿菌間接ELISA檢測試劑盒，其特征在于：所述間接ELISA檢測試劑盒檢測蠟樣芽孢桿菌抗體的方法，包括以下步驟：
（1）用抗原包被液將蠟樣芽孢桿菌菌懸液1：60稀釋，包被酶標板，4℃包被過夜；
（2）取出酶標板，用PBST溶液洗滌，加入封閉液，37℃封閉2h；
（3）分別加入1：200稀釋后的牛源致病性蠟樣芽孢桿菌陽性血清、牛源致病性蠟樣芽孢桿菌陰性血清和待檢血清；37℃孵育1h；
（4）加入按1:8000稀釋的酶標二抗，37℃孵育1h；
（5）加入底物顯色液，37℃避光反應15min；
（6）加入終止液終止反應，在450nm處讀取吸光值，對檢測結果進行判定，若待測樣品的OD450nm 0.525，判定為陽性，反之則為陰性。
8.根據權利要求7牛源致病性蠟樣芽孢桿菌間接ELISA檢測試劑盒，其特征在于：所述抗原包被液的制備方法：將1.465g NaHCO3和0.795g Na2CO3，溶于400mL去離子水并定容至500mL，用NaOH調 pH值至9.5。
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