[發(fā)明專利]一種從鮭魚精液中分離脫氧核苷酸的方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202110391188.7 | 申請日： | 2021-04-13 |
| 公開（公告）號： | CN113105515A | 公開（公告）日： | 2021-07-13 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 王娟;江柏 | 申請（專利權(quán)）人： | 瑞吉明（山東）生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C07H19/04 | 分類號： | C07H19/04;C07H1/08 |
| 代理公司： | 深圳至誠化育知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 44728 | 代理人： | 劉英 |
| 地址： | 264003 山東省煙臺市*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 鮭魚 精液 分離 脫氧 核苷酸 方法 | ||
本發(fā)明公開了一種從鮭魚精液中分離脫氧核苷酸的方法，分離步驟包括如下：S1：準(zhǔn)備新鮮或冰凍鮭魚精液組織體，并置于玻璃勻漿器中，加入定量的細(xì)胞裂解緩沖液，并勻漿至不見組織凝結(jié)塊，然后轉(zhuǎn)移到離心管中并加入蛋白酶K，使其混勻，在恒溫水浴鍋中水浴固定的時間，并間歇振蕩離心管數(shù)次初步得到混合液體。本發(fā)明通過采用溶解并離心分離提純的方式，并加入定量的蛋白酶K、TE緩沖液和無水乙醇等材料，經(jīng)過震蕩、分離等步驟即可分離出鮭魚精液中的脫氧核苷酸成分，這樣的分離方法分離出來的脫氧核苷酸純度較高，較之傳統(tǒng)的分離方法更加的簡單明了，非常的方便人員進(jìn)行操作，可以高效、簡單的完成脫氧核苷酸的分離工作，具有較強的推廣價值。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其是一種從鮭魚精液中分離脫氧核苷酸的方法。
背景技術(shù)
鮭魚屬于深海魚類三文魚，是深海魚類的一種，也是一種非常有名的溯河洄游魚類，它在淡水江河上游的溪河中產(chǎn)卵，產(chǎn)后再回到海洋肥育，而脫氧核苷酸又名脫氧核糖核酸，是一類由嘌呤或嘧啶堿基、脫氧核糖以及磷酸三種物質(zhì)組成的小分子化合物，它可以從鮭魚精液中分離提取出來。
現(xiàn)市面上的從鮭魚精液中分離脫氧核苷酸的方法大多數(shù)都是采用傳統(tǒng)的提純、分離、過濾等方法，在分離的過程中需要花費較多的步驟，且分離所需的時間較長，工作人員在操作時需要嚴(yán)格按照較多的分離步驟進(jìn)行操作，一不注意就容易出現(xiàn)失誤的情況，其分離方法不夠高效，應(yīng)用時存在一定的局限性。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對背景技術(shù)中的不足，提供了一種從鮭魚精液中分離脫氧核苷酸的方法。
本發(fā)明為解決上述現(xiàn)象，采用以下技術(shù)方案，一種從鮭魚精液中分離脫氧核苷酸的方法，分離方法包括如下：
S1，準(zhǔn)備新鮮或冰凍鮭魚精液組織體，并置于玻璃勻漿器中，加入定量的細(xì)胞裂解緩沖液，并勻漿至不見組織凝結(jié)塊，然后轉(zhuǎn)移到離心管中并加入蛋白酶K，使其混勻，在恒溫水浴鍋中水浴固定的時間，并間歇振蕩離心管數(shù)次初步得到混合液體；
S2，將混合液體放置在臺式離心機進(jìn)行離心分離，即可獲得清液并放置在新的離心管內(nèi)；
S3，加入兩倍分量的異丙醇，和清液攪拌均勻后可以看見明顯的絲狀物，然后使用吸頭進(jìn)行吸取，等待其自然風(fēng)干后用TE緩沖液重新溶解；
S4，加入等量的酚：氯仿：異戊醇振蕩混勻；
S5：取二分之一溶液轉(zhuǎn)移至另一離心管中，加入1/3體積的6.8mol/L乙酸氨，以及兩倍體積的無水乙醇，在混勻后放置在室溫環(huán)境內(nèi)進(jìn)行沉淀，然后進(jìn)行離心分離；
S6：再次加入TE緩沖液重新溶解沉淀物，然后置于溫度為6℃的環(huán)境中自然冷卻沉淀，最后吸取上層溶液即可成功分離出脫氧核苷酸。
作為本發(fā)明的進(jìn)一步優(yōu)選方式，步驟S1中，準(zhǔn)備新鮮或冰凍鮭魚精液組織體，分量為1.3g，如果是冰凍鮭魚精液，則采用工具將其破碎開來。
作為本發(fā)明的進(jìn)一步優(yōu)選方式，步驟S1中，細(xì)胞裂解緩沖液的分量為3ml，同時水浴鍋的溫度設(shè)為65℃，水浴時間設(shè)為36min。
作為本發(fā)明的進(jìn)一步優(yōu)選方式，步驟S2中，離心機在運行時的離心力為12000rpm，離心時間設(shè)為8min。
作為本發(fā)明的進(jìn)一步優(yōu)選方式，步驟S3中，吸頭的容積為100ul，自然風(fēng)干時間為8.6h。
作為本發(fā)明的進(jìn)一步優(yōu)選方式，步驟S4中，加入等量的酚：氯仿：異戊醇振蕩混勻，同時離心力為12000rpm，離心時間為6min。
作為本發(fā)明的進(jìn)一步優(yōu)選方式，步驟S5中，取二分之一溶液轉(zhuǎn)移至另一離心管中，加入1/3體積的6.8mol/L乙酸氨，以及兩倍體積的無水乙醇，在混勻后放置在室溫環(huán)境內(nèi)進(jìn)行沉淀，同時沉淀時間為16min，然后進(jìn)行離心分離，離心力為12000rpm，離心時間設(shè)為10min。
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