[發明專利]一種從鮭魚精液中分離脫氧核苷酸的方法

在審

• 申請號: 202110391188.7
• 申請日: 2021-04-13
• 公開（公告）號: CN113105515A
• 公開（公告）日: 2021-07-13
• 發明（設計）人: 王娟;江柏
• 申請（專利權）人: 瑞吉明（山東）生物科技有限公司
• 主分類號: C07H19/04
• 分類號: C07H19/04;C07H1/08
• 代理公司: 深圳至誠化育知識產權代理事務所(普通合伙) 44728
• 代理人: 劉英

1.一種從鮭魚精液中分離脫氧核苷酸的方法，其特征在于，分離步驟如下：

S1：準備新鮮或冰凍鮭魚精液組織體，并置于玻璃勻漿器中，加入定量的細胞裂解緩沖液，并勻漿至不見組織凝結塊，然后轉移到離心管中并加入蛋白酶K，使其混勻，在恒溫水浴鍋中水浴固定的時間，并間歇振蕩離心管數次初步得到混合液體；

S2：將混合液體放置在臺式離心機進行離心分離，即可獲得清液并放置在新的離心管內；

S3：加入兩倍分量的異丙醇，和清液攪拌均勻后可以看見明顯的絲狀物，然后使用吸頭進行吸取，等待其自然風干后用TE緩沖液重新溶解；

S4：加入等量的酚：氯仿：異戊醇振蕩混勻；

S5：取二分之一溶液轉移至另一離心管中，加入1/3體積的6.8mol/L乙酸氨，以及兩倍體積的無水乙醇，在混勻后放置在室溫環境內進行沉淀，然后進行離心分離；

S6：再次加入TE緩沖液重新溶解沉淀物，然后置于溫度為6℃的環境中自然冷卻沉淀，最后吸取上層溶液即可成功分離出脫氧核苷酸。

2.根據權利要求1所述的一種從鮭魚精液中分離脫氧核苷酸的方法的制備方法，其特征在于，步驟S1中，準備新鮮或冰凍鮭魚精液組織體，分量為1.3g，如果是冰凍鮭魚精液，則采用工具將其破碎開來。

3.根據權利要求1所述的一種從鮭魚精液中分離脫氧核苷酸的方法的制備方法，其特征在于，步驟S1中，細胞裂解緩沖液的分量為3ml，同時水浴鍋的溫度設為65℃，水浴時間設為36min。

4.根據權利要求1所述的一種從鮭魚精液中分離脫氧核苷酸的方法的制備方法，其特征在于，步驟S2中，離心機在運行時的離心力為12000rpm，離心時間設為8min。

5.根據權利要求1所述的一種從鮭魚精液中分離脫氧核苷酸的方法的制備方法，其特征在于，步驟S3中，吸頭的容積為100ul，自然風干時間為8.6h。

6.根據權利要求1所述的一種從鮭魚精液中分離脫氧核苷酸的方法的制備方法，其特征在于，步驟S4中，加入等量的酚：氯仿：異戊醇振蕩混勻，同時離心力為12000rpm，離心時間為6min。

7.根據權利要求1所述的一種從鮭魚精液中分離脫氧核苷酸的方法的制備方法，其特征在于，步驟S5中，取二分之一溶液轉移至另一離心管中，加入1/3體積的6.8mol/L乙酸氨，以及兩倍體積的無水乙醇，在混勻后放置在室溫環境內進行沉淀，同時沉淀時間為16min，然后進行離心分離，離心力為12000rpm，離心時間設為10min。