[發明專利]篩選大豆材料的分子標記、篩選方法、育種方法和應用

有效

• 申請號: 202110388662.0
• 申請日: 2021-04-12
• 公開（公告）號: CN113046464B
• 公開（公告）日: 2021-10-22
• 發明（設計）人: 王嘉;楊文英;于曉波;梁建秋;曾召瓊;安建剛;馮軍;吳海英;張明榮
• 申請（專利權）人: 南充市農業科學院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 成都為知盾專利代理事務所(特殊普通合伙) 51267
• 代理人: 楊宜付

1.一種篩選高蛋白大豆材料的分子標記引物組，其特征在于，所述分子標記引物組包括InDel標記引物對和dCAPS標記引物對；

所述InDel標記引物對堿基序列如下：

NC_SAM-InDelF：AAGCCTTTTGAGTTGTGGA；

NC_SAM-InDelR：ATTGCTATTTCCCTTCTGC；

所述dCAPS標記引物對堿基序列如下：

NC_BET12dCAPSF：ATGTAGAAGCAGGAGCAGAAGAGGGGGATC；

NC_BET12dCAPSR：TAAAGAAGAACTGCTGGAA；

其中，InDel標記引物擴增條帶為160bp，同時dCAPS標記篩選獲得的基因型為C的大豆材料為高蛋白大豆材料。

2.一種利用權利要求1所述引物組篩選高蛋白大豆材料的方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1.1選擇所述InDel標記作為引物對；

S1.2第一PCR擴增 利用所述InDel標記的引物對，選擇一個或多個大豆品種DNA進行第一PCR擴增；

S1.3第一電泳檢測 將S1.2第一PCR擴增產物進行第一電泳檢測，第一電泳檢測條帶以204bp片段呈現的大豆品種為低蛋白品種，第一電泳檢測條帶以160bp片段呈現的大豆品種為高蛋白品種。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，還包括如下步驟：

S2.1選擇所述dCAPS標記作為引物對；

S2.2第二PCR擴增 利用所述dCAPS標記的引物對，對S1.2所述大豆品種DNA進行第二PCR擴增；

S2.3酶切 用限制性內切酶BamHI酶切S2.2第二PCR擴增產物，進行酶切擴增多態性分析；

S2.4第二電泳檢測 將S2.3酶切所得片段進行第二電泳檢測，第二電泳檢測條帶以124bp片段呈現的大豆品種為低蛋白品種；第二電泳檢測條帶以90bp片段呈現的大豆品種為高蛋白品種。

4.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述第一PCR擴增具體操作如下：

第一PCR反應體系為：2×Taq Master Mix 12.5μL，10μM正向引物NC_SAM-InDelF和10μM反向引物NC_SAM-InDelR各1μL，100ng/μLDNA模板1μL，ddH₂O補齊至25μL；

第一PCR反應程序：94℃預變性1min30s；94℃變性20s，55℃退火20s，72℃延伸30s，30個循環；72℃延伸5min。

5.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述第一電泳檢測具體操作如下：取6μL第一PCR產物在1.2％的瓊脂糖凝膠上進行電泳檢測，電泳條件為130V，15分鐘。

6.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述第二PCR擴增具體操作如下：

第二PCR反應體系為：2×Taq Master Mix 12.5μL，10μM正向引物NC_BET12dCAPSF和10μM反向引物NC_BET12dCAPSR各1μL，100ng/μLDNA模板1μL，ddH₂O補齊至25μL；

第二PCR反應程序：94℃預變性1min30s；94℃變性20s，55℃退火20s，72℃延伸30s，30個循環；72℃延伸5min。

7.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述酶切的具體操作如下：

酶切的反應體系為：10×FastDigest Buffer 2μL，第二PCR擴增產物10μL，BamHI限制性內切酶2μL，ddH₂O補齊至20μL，37℃酶切反應2h。

8.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述第二電泳檢測的具體操作為：

取6μL酶切所得片段在2.0％的瓊脂糖凝膠上進行電泳檢測，電泳條件為130V，60分鐘。

9.一種權利要求1所述篩選高蛋白大豆材料的分子標記引物組的應用，其特征在于，所述引物組用于篩分大豆高含油量材料或高蛋白材料。