[發明專利]內臟利什曼病感染病原體蟲種鑒定的試劑盒

有效

• 申請號: 202110387134.3
• 申請日: 2021-04-12
• 公開（公告）號: CN112795676B
• 公開（公告）日: 2021-07-30
• 發明（設計）人: 楊國威;吳云;王磊
• 申請（專利權）人: 首都醫科大學附屬北京友誼醫院
• 主分類號: C12Q1/6893
• 分類號: C12Q1/6893;C12Q1/6851;C12Q1/06;C12N15/11;C12R1/90
• 代理公司: 北京領科知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11690
• 代理人: 徐丹丹;張丹

本發明提供了一種利什曼原蟲蟲種鑒定的試劑盒或芯片、利什曼原蟲蟲種鑒定的探針組、利什曼原蟲蟲種鑒定的擴增引物對以及在鑒定利什曼原蟲蟲種中的應用或者在制備診斷利什曼病的產品中的應用。本發明還提供了一種鑒定利什曼原蟲蟲種的方法。采用本發明提供的試劑盒或芯片可以準確鑒定內臟利什曼病感染原蟲L.donovani和L.infantum。與現有的技術相比具有可應用于臨床，使用便捷，鑒定準確的優勢，可以推廣使用。

技術領域

本發明涉及一種寄生蟲蟲種鑒定技術，具體涉及一種內臟利什曼病感染病原體的蟲種鑒定的方法。

背景技術

利什曼病是由利什曼原蟲（Leishmania spp.）寄生于人體引起的疾病，通過受感染的雌性白蛉叮咬傳播。根據不同種的利什曼原蟲在人體的寄生部位和臨床表現，利什曼原蟲可引起一系列疾病，以皮膚利什曼和內臟利什曼病最為常見，其中內臟利什曼病在兩年內得不到及時有效的治療，會造成致命的后果。

明確感染原蟲的蟲種對臨床用藥，患者管理以及疾病防控具有重要的指導作用。目前臨床對利什曼原蟲的蟲種鑒定主要從流行病學以及臨床背景進行推斷，實驗室分型主要依賴于擴增利什曼原蟲的核糖體DNA內轉錄間隔區基因（ITS1，ITS2），核糖體RNA小亞基基因（SSU rRNA）以及熱激蛋白70基因（HSP70）等單一基因并進行測序比對，該方法基于普通PCR并通過產物分析進行蟲種的鑒定，容易造成實驗室氣溶膠的污染，而且結果往往不準確。分子分型的方法（RFLP，RAPD，MLEE等）雖然分型結果較為準確，但操作繁瑣，技術難度大，實驗室之間的可比性較差，并不適合于臨床應用。

發明內容

基于現有技術中的缺陷，本申請應用內臟利什曼病感染原蟲不同蟲種保守基因的序列多態性設計等位基因特異性引物、探針組合構建熒光定量PCR技術建立內臟利什曼病感染原蟲L.donovani（Leishmania donovani，杜氏利什曼原蟲）和L.infantum（Leishmania infantum，嬰兒利什曼原蟲）的鑒別診斷檢測體系。該方法的建立使得臨床具有可應用的準確、便捷的利什曼病感染原蟲的蟲種鑒定方法，該方法應用于臨床對于指導臨床用藥，預后判斷以及利什曼原蟲的預防控制具有重要意義。具體的，

本發明提供了一種利什曼原蟲蟲種鑒定的試劑盒或芯片，所述的試劑盒或芯片包含針對HGPRT基因的擴增引物對和探針組，所述的HGPRT基因的核苷酸序列包含SEQ ID NO：7、8、9、10或11。

優選的，所述的探針組中的探針為針對HGPRT基因的SNPs位點設計。其中，HGPRT基因的SNPs位點位于SEQ ID NO：7、8、9、10或11的第29位和/或35位。

優選的，所述的探針組中的探針長度為現有技術中常規設計的長度。優選為15-30bp。

優選的，所述的探針組包含SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4。

ACAGAAGTTTTAAGTTGACGACC（SEQ ID NO：3）

ACAGAAGCTTTAAATTGACGACC（SEQ ID NO：4）

優選的，所述探針組中探針的5’端包含熒光報告基團的修飾，3’端包含熒光淬滅基團的修飾。