[發明專利]內臟利什曼病感染病原體蟲種鑒定的試劑盒

有效

• 申請號: 202110387134.3
• 申請日: 2021-04-12
• 公開（公告）號: CN112795676B
• 公開（公告）日: 2021-07-30
• 發明（設計）人: 楊國威;吳云;王磊
• 申請（專利權）人: 首都醫科大學附屬北京友誼醫院
• 主分類號: C12Q1/6893
• 分類號: C12Q1/6893;C12Q1/6851;C12Q1/06;C12N15/11;C12R1/90
• 代理公司: 北京領科知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11690
• 代理人: 徐丹丹;張丹

1.一種利什曼原蟲蟲種鑒定的試劑盒或芯片，其特征在于，所述的試劑盒或芯片包含針對HGPRT基因的擴增引物對和探針組，所述的HGPRT基因的核苷酸序列包含SEQ ID NO：7或9，所述的利什曼原蟲蟲種為Leishmania donovani或Leishmania infantum，所述的探針組包含ACAGAAGTTTTAAGTTGACGACC（SEQ ID NO：3）和ACAGAAGCTTTAAATTGACGACC（SEQ IDNO：4），

所述的擴增引物對為：

A）上游：5’-AGAAGATTGCAGAGGACT-3’（SEQ ID NO：1），

下游：5’-AACTCCACCTTCACCGGGACA-3’（SEQ ID NO：2）；

或，

B）上游：5’-aaacgacggccagtgaattcAGAAGATTGCAGAGGACT-3’（SEQ ID NO：5），

下游：5’-accatgattacgccaagcttAACTCCACCTTCACCGGGACA-3（SEQ ID NO：6）。

2.根據權利要求1所述的試劑盒或芯片，其特征在于，所述探針組中探針的5’端包含熒光報告基團的修飾，3’端包含熒光淬滅基團的修飾，所述的熒光報告基團選自VIC、6-FAM、Tex Red、HEX、TET、JOE、Cy3、Cy5、ROX、LC RED640或LC RED705，所述的熒光淬滅基團選自DABCYL、BHQ1、BHQ2或BHQ3。

3.根據權利要求1所述的試劑盒或芯片，其特征在于，所述的探針組為5’-6-FAM-SEQID NO：3-BHQ1-3’和5’-VIC-SEQ ID NO：4-BHQ1-3’。

4.根據權利要求1-3任一所述的試劑盒或芯片，其特征在于，所述的試劑盒還包含PCR反應所需試劑，所述的PCR反應所需試劑選自Taq DNA聚合酶、dNTPs、酶穩定劑、Taq DNA聚合酶反應緩沖液、溴酚藍染料或水中的一種或兩種以上的組合。

5.一種鑒定利什曼原蟲蟲種的方法，其特征在于，所述的方法包括：

獲得樣本總DNA；

PCR擴增所述的總DNA，或者對樣本總DNA進行測序，采用探針組確定關鍵堿基；

其中，PCR反應體系包含探針組和擴增引物對，

所述的探針組為：

5’-6-FAM-ACAGAAGTTTTAAGTTGACGACC（SEQ ID NO：3）-BHQ1-3’和5’-VIC-ACAGAAGCTTTAAATTGACGACC（SEQ ID NO：4）-BHQ1-3’，

所述的擴增引物對為：

A）上游：5’-AGAAGATTGCAGAGGACT-3’（SEQ ID NO：1），

下游：5’-AACTCCACCTTCACCGGGACA-3’（SEQ ID NO：2）；

或，

B）上游：5’-aaacgacggccagtgaattcAGAAGATTGCAGAGGACT-3’（SEQ ID NO：5），

下游：5’-accatgattacgccaagcttAACTCCACCTTCACCGGGACA-3（SEQ ID NO：6），

所述方法是非疾病的診斷和治療目的的。

6.一種權利要求1-4任一所述試劑盒或芯片在鑒定利什曼原蟲蟲種中的應用或者在制備診斷利什曼病的產品中的應用，所述在鑒定利什曼原蟲蟲種中的應用是非疾病的診斷和治療目的的。