[發明專利]具有拮抗臨床耐藥性細菌功能的新型細胞松弛素化合物及其制備方法

有效

• 申請號: 202110385287.4
• 申請日: 2021-04-09
• 公開（公告）號: CN113248513B
• 公開（公告）日: 2022-10-21
• 發明（設計）人: 楊小龍;牟青林;王文靜;向婷
• 申請（專利權）人: 中南民族大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C07D491/20;C07D209/96;C12P17/18;A61P31/04;C12R1/645
• 代理公司: 昆明正原專利商標代理有限公司 53100
• 代理人: 于洪;金耀生

1.具有拮抗臨床耐藥性細菌功能的新型細胞松弛素化合物的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟(1)，將金黃殼囊胞菌HYQZ-931的發酵培養；

步驟(2)，采用甲醇提取金黃殼囊胞菌發酵培養得到的次級代謝產物，減壓濃縮蒸發掉溶劑后水洗，然后用乙酸乙酯萃取，最后再減壓濃縮，得到粗浸膏；

步驟(3)，粗浸膏濕法上樣至硅膠柱，通過硅膠柱層析法，以體積比為100∶1-1∶1的二氯甲烷和甲醇混合有機溶劑進行梯度洗脫，收集各梯度的梯度洗脫液并濃縮，經TLC監測，合并相同的部分，得到六個組分段Fr.A-Fr.F；

步驟(4)，將第四個組分段Fr.D濕法上樣至硅膠柱，通過硅膠柱層析法，以體積比為50∶1-1∶1的二氯甲烷和甲醇混合有機溶劑進行梯度洗脫，收集各梯度的梯度洗脫液并濃縮，經TLC監測，合并相同的部分，得到四個亞組分段Fr.D₁-Fr.D₄；

步驟(5)，對第二個亞組分段Fr.D₂依次經葡聚糖凝膠色譜分離純化及高效液相色譜分離純化得到化合物2；

步驟(6)，對第四個亞組分段Fr.D₄采用葡聚糖凝膠色譜分離純化，收集分離純化液體后靜置，待晶體析出后，用二氯甲烷清洗晶體表面雜質，最后得到純的晶體化合物，即為化合物1；

其中，化合物2的結構式為：

化合物1的結構式為：

2.根據權利要求1所述的具有拮抗臨床耐藥性細菌功能的新型細胞松弛素化合物的制備方法，其特征在于，步驟(1)具體方法如下：

(1.1)將金黃殼囊胞菌在PDA平板上活化；

(1.2)已活化的金黃殼囊胞菌菌絲體加入到PDB培養基中，在搖床上恒溫振蕩培養，制備該菌種種子液；

(1.3)將菌種種子液倒入固體培養基中恒溫發酵培養；

所述的固體培養基是將MEB溶液和大米按照體積質量比1：1mL/g的比例配制而成。

3.根據權利要求2所述的具有拮抗臨床耐藥性細菌功能的新型細胞松弛素化合物的制備方法，其特征在于，(1.1)中，活化時間為3天；(1.2)中，恒溫振蕩培養的條件為28℃，160rpm，3天；(1.3)中，恒溫發酵培養的條件為28℃，30天。

4.根據權利要求1所述的具有拮抗臨床耐藥性細菌功能的新型細胞松弛素化合物的制備方法，其特征在于，步驟(2)中，減壓濃縮的壓力為-0.1Mpa，溫度為-20℃。

5.根據權利要求1所述的具有拮抗臨床耐藥性細菌功能的新型細胞松弛素化合物的制備方法，其特征在于，步驟(3)中，梯度洗脫時，所使用的二氯甲烷和甲醇混合有機溶劑的體積比依次為100：1、80：1、50：1、30：1、10：1和1：1；每個梯度洗脫到TLC點板無明顯主點后即可更換下一個濃度梯度；

步驟(4)中，梯度洗脫時，所使用的二氯甲烷和甲醇混合有機溶劑的體積比依次為50：1、20：1、10：1、1：1；每個梯度洗脫到TLC點板無明顯主點后即可更換下一個濃度梯度。

6.根據權利要求1所述的具有拮抗臨床耐藥性細菌功能的新型細胞松弛素化合物的制備方法，其特征在于，步驟(5)中，高效液相色譜分離純化條件為：以體積濃度為70％的乙腈水溶液為流動相，采用安捷倫C₁₈反向色譜柱，規格為：4.6mmx250nm，5um；柱溫：30℃；柱流量：1ml/min；每次進樣量：20ul；采用紫外檢測器，檢測波長為210nm， 收集t_R＝12.8min的色譜峰，多次累加后蒸干；

步驟(6)中，靜置時間為不少于5d。

7.權利要求1所述的具有拮抗臨床耐藥性細菌功能的新型細胞松弛素化合物，其特征在于，該細胞松弛素化合物為化合物1，其結構式為：

8.權利要求1所述的具有拮抗臨床耐藥性細菌功能的新型細胞松弛素化合物，其特征在于，該細胞松弛素化合物為化合物2，其結構式為：