[發(fā)明專利]具有拮抗臨床耐藥性細(xì)菌功能的新型細(xì)胞松弛素化合物及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110385287.4
• 申請(qǐng)日: 2021-04-09
• 公開（公告）號(hào): CN113248513B
• 公開（公告）日: 2022-10-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊小龍;牟青林;王文靜;向婷
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中南民族大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/14
• 分類號(hào): C12N1/14;C07D491/20;C07D209/96;C12P17/18;A61P31/04;C12R1/645
• 代理公司: 昆明正原專利商標(biāo)代理有限公司 53100
• 代理人: 于洪;金耀生

本發(fā)明涉及具有拮抗臨床耐藥性細(xì)菌功能的新型細(xì)胞松弛素化合物及其制備方法，屬于生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。該方法首先將金黃殼囊胞菌發(fā)酵培養(yǎng)；然后采用甲醇提取金黃殼囊胞菌發(fā)酵培養(yǎng)得到的次級(jí)代謝產(chǎn)物，乙酸乙酯萃取，減壓濃縮，得到的粗浸膏梯度洗脫得到六個(gè)組分段，將第四個(gè)組分段再次梯度洗脫，得到四個(gè)亞組分段；分別對(duì)第二個(gè)亞組分段和第四個(gè)亞組分段采用葡聚糖凝膠色譜分離純化及高效液相色譜分離純化，得到兩個(gè)新型細(xì)胞松弛素；這兩個(gè)新型細(xì)胞松弛素對(duì)耐碳青霉烯銅綠假單胞菌、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌、多耐藥性糞腸球菌、多耐藥性屎腸球菌四種臨床耐藥性細(xì)菌有很強(qiáng)的拮抗作用，有望開發(fā)成新型抗臨床耐藥性細(xì)菌的藥物。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及具有拮抗臨床耐藥性細(xì)菌功能的新型細(xì)胞松弛素化合物及其制備方法。

背景技術(shù)

耐藥性細(xì)菌是指那些對(duì)傳統(tǒng)抗菌藥物具有耐受性的細(xì)菌，這是細(xì)菌自身生存過程中的一種特殊變現(xiàn)形式，當(dāng)長(zhǎng)期使用抗生素，大多數(shù)的敏感菌株不斷被殺滅，耐藥菌株就大量繁殖，代替敏感菌株，而使細(xì)菌對(duì)該種藥物的耐藥率不斷升高，一旦耐藥性產(chǎn)生，藥物的治療作用就明顯下降甚至于完全失去治療作用。近些年來，由于抗生素的濫用，全世界范圍內(nèi)產(chǎn)生了大量的耐藥性細(xì)菌，早在2014年世界衛(wèi)生組織就曾發(fā)布報(bào)告稱，抗生素耐藥性細(xì)菌正在全球蔓延，在這些耐藥性細(xì)菌里面，比較出名的就包括耐甲氧西林金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、多耐藥性糞腸球菌、多耐藥性屎腸球菌、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌、耐碳青霉烯銅綠假單胞菌等等。

細(xì)胞松弛素是一種由真菌產(chǎn)生的的生物堿類次級(jí)代謝產(chǎn)物。此類化合物在細(xì)胞內(nèi)同微絲的正端結(jié)合，并引起F-肌動(dòng)蛋白解聚，阻斷亞基的進(jìn)一步聚合，當(dāng)將細(xì)胞松弛素加入到活細(xì)胞后，肌動(dòng)蛋白纖維骨架消失，使動(dòng)物細(xì)胞的各種活動(dòng)癱瘓，包括細(xì)胞的移動(dòng)、吞噬作用、胞質(zhì)分裂等，因此取名為細(xì)胞松弛素。但是它對(duì)微管沒有作用，也不抑制肌收縮。

為了防止出現(xiàn)的耐藥性細(xì)菌不斷威脅人們身體健康，有大量的研究者在不斷的去挖掘新型抗生素或者能夠應(yīng)對(duì)抗臨床耐藥性細(xì)菌的新型分子。這里面就包括著名的Teixobactin抗生素，它是由美國(guó)西北大學(xué)，吉姆·里維斯團(tuán)隊(duì)發(fā)現(xiàn)的新型抗生素分子，它對(duì)MRSA細(xì)菌等具有非常強(qiáng)的拮抗作用，而且可以治療肺結(jié)核、敗血病等多種常見的感染。近些年來，雖然不斷有能夠拮抗臨床耐藥性細(xì)菌的新型分子被報(bào)道，但是很少有學(xué)者報(bào)道了細(xì)胞松弛素類化合物對(duì)臨床抗耐藥性細(xì)菌的拮抗作用。

發(fā)明內(nèi)容

近些年來由于抗生素濫用，全世界范圍內(nèi)出現(xiàn)了多種臨床耐藥性細(xì)菌，這些耐藥性細(xì)菌正在一步步威脅人們的身體健康，為了解決這一世界性公共衛(wèi)生難題，各國(guó)研究者都在不停的開發(fā)能夠拮抗耐藥性細(xì)菌的新型分子。在本發(fā)明中，我們首次發(fā)現(xiàn)了從真菌次級(jí)代謝產(chǎn)物中發(fā)現(xiàn)的新型細(xì)胞松弛素化合物(cytochrysins A，cytochrysins B)，并研究了它們對(duì)多株臨床耐藥性細(xì)菌的拮抗作用，最終我們發(fā)現(xiàn)cytochrysins A，cytochrysinsB兩個(gè)新型細(xì)胞松弛素化合物對(duì)耐碳青霉烯銅綠假單胞菌、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌、多耐藥性糞腸球菌、多耐藥性屎腸球菌四種臨床耐藥性細(xì)菌有很強(qiáng)的拮抗作用(MIC，25μg/mL)，繼續(xù)下一步深入研究，有望開發(fā)成新型抗臨床耐藥性細(xì)菌的藥物。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

具有拮抗臨床耐藥性細(xì)菌功能的新型細(xì)胞松弛素化合物及其制備方法，包括如下步驟：

步驟(1)，將金黃殼囊胞菌的發(fā)酵培養(yǎng)；

步驟(2)，采用甲醇提取金黃殼囊胞菌發(fā)酵培養(yǎng)得到的次級(jí)代謝產(chǎn)物，減壓濃縮蒸發(fā)掉溶劑后水洗，然后用乙酸乙酯萃取，最后再減壓濃縮，得到粗浸膏；

步驟(3)，粗浸膏濕法上樣至硅膠柱，通過硅膠柱層析法，以體積比為100∶1-1∶1的二氯甲烷和甲醇混合有機(jī)溶劑進(jìn)行梯度洗脫，收集各梯度的梯度洗脫液并濃縮，經(jīng)TLC監(jiān)測(cè)，合并相同的部分，得到六個(gè)組分段Fr.A-Fr.F；