[發明專利]用于MGI平臺高通量測序文庫快速定量的方法及試劑盒

有效

• 申請號: 202110383434.4
• 申請日: 2021-04-09
• 公開（公告）號: CN113186262B
• 公開（公告）日: 2022-11-25
• 發明（設計）人: 楊超;凡海峰;秦楠
• 申請（專利權）人: 上海銳翌生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6851
• 分類號: C12Q1/6851;C12Q1/6876;C12N15/11
• 代理公司: 北京清亦華知識產權代理事務所(普通合伙) 11201
• 代理人: 肖陽

本發明提供了一種用于MGI平臺高通量測序文庫快速定量方法及試劑盒。該方法包括利用含有引物和探針的組合物對待測高通量測序文庫進行熒光定量PCR檢測；含有引物和探針的組合物包括檢測MGI文庫的第一引物和第一探針，和檢測擬南芥PHYA基因的第二引物和第二探針，第一引物包括SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示序列，第一探針包括SEQ IDNO:3所示序列。試劑盒包括第一引物和第一探針，還包括第二引物和第二探針，第二引物包括SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5所示序列，第二探針包括SEQ ID NO:6所示序列。所提供的方法或試劑盒可用于對高通量測序文庫快速定量。

技術領域

本發明屬于基因測序領域，具體涉及一種用于MGI平臺高通量測序文庫快速定量的方法及試劑盒。

背景技術

高通量測序(NGS)文庫制備的目的是，在片段化后的待測核酸片段上連接特異性的接頭序列，讓它們能夠在高通量測序平臺上進行測序。NGS文庫的質量對于高通量測序產出的數據質量至關重要。因此，NGS文庫在上機測序之前，需要對其濃度進行精準測定，以便上機測序時能夠調整得到合適的上機測序濃度，最終獲得最優的測序數據結果。

對NGS文庫進行熒光定量PCR(QPCR)法檢測，可以實現樣品的定量檢測。其是使用特異性引物對文庫中兩端接頭連接完整的樣品，進行檢測，通過該方法可以排除單端或雙端都不連接接頭的不可測序文庫的干擾，是目前行業內進行文庫定量的首選方法。

然而，常規的QPCR法均采用熒光染料法，不僅特異性低，其非特異性擴增也會增加定量不準的風險。因此，針對高通量測序文庫的熒光定量檢測還需要進一步改進。

發明內容

本發明在一定程度上解決上述技術問題。針對NGS文庫的QPCR法定量檢測，是以Taqman探針法為主。要實現高通量測序文庫的絕對定量，需要將待測NGS文庫的檢測結果，與標準品制備的標準曲線進行比較，通過標準曲線進行相對定量，然后再根據待測NGS文庫的片段與標準品片段的大小差異進行定量結果的校正。理論上，NGS文庫定量方法Taqman探針QPCR定量檢測，能夠比較準確的定量NGS文庫，為上機測序提供準確的濃度信息。為此本發明提供了一種用于MGI平臺高通量測序文庫快速定量的方法及試劑盒。

本發明的第一方面提供了一種用于MGI平臺高通量測序文庫定量檢測的方法，其包括：

提供待測高通量測序文庫；

利用含有引物和探針的組合物對所述待測高通量測序文庫進行熒光定量PCR檢測，以便獲得摩爾濃度定量結果；

所述含有引物和探針的組合物包括：檢測MGI文庫的第一引物和第一探針，和檢測擬南芥PHYA基因的第二引物和第二探針，

所述第一引物包括SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示序列，所述第一探針包括SEQID NO:3所示序列。

本發明所提供的方法可以用于高通量測序文庫的快速定量。本發明基于多重熒光定量PCR技術，采用MGI文庫特異性引物和熒光標記探針，引入外源擬南芥基因PHYA作為內標，能夠在保證擴增體系成功的條件評估靶標擴增質量，進一步保證結果的準確性和有效性。相對于現有的QUBIT和QSEQ100核酸文庫的濃度定量檢測，操作繁瑣，時間人力成本高，定量出的DNA片段大小本身不一致難以絕對統一等諸多弊端而言；本發明所提供的方法能夠更準確的獲得高通量測序文庫的實際摩爾濃度，且無需進行基于高通量測序文庫DNA片段大小的校正，這對高通量測序具有重要意義，可以提高測序質量，從而獲得最優的測序數據結果。

本發明的第二方面提供了一種用于高通量測序文庫定量檢測的試劑盒，包括：

檢測MGI文庫的第一引物和第一探針，所述第一引物包括SEQ ID NO:1和SEQ IDNO:2所示序列，所述第一探針包括SEQ ID NO:3所示序列；