[發(fā)明專利]用于MGI平臺(tái)高通量測(cè)序文庫快速定量的方法及試劑盒有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 202110383434.4 | 申請(qǐng)日： | 2021-04-09 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN113186262B | 公開（公告）日： | 2022-11-25 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 楊超;凡海峰;秦楠 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 上海銳翌生物科技有限公司 |
| 主分類號(hào)： | C12Q1/6851 | 分類號(hào)： | C12Q1/6851;C12Q1/6876;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京清亦華知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11201 | 代理人： | 肖陽 |
| 地址： | 201114 上海市閔行區(qū)*** | 國省代碼： | 上海;31 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 用于 mgi 平臺(tái) 通量 序文 快速 定量 方法 試劑盒 | ||
1.一種用于MGI平臺(tái)高通量測(cè)序文庫定量檢測(cè)的方法，其特征在于，包括：
（1）提供待測(cè)高通量測(cè)序文庫，其包括文庫稀釋液，所述文庫稀釋液中存在擬南芥PHYA基因片段，所述擬南芥PHYA基因片段序列如SEQ ID NO:7所示；所述高通量測(cè)序文庫為非植物物種基因組文庫；
（2）提供陽性標(biāo)準(zhǔn)品，所述陽性標(biāo)準(zhǔn)品為含有MGI文庫片段的質(zhì)粒，所述陽性標(biāo)準(zhǔn)品中所含有的MGI文庫片段序列如SEQ ID NO:8所示；
（3）利用檢測(cè)MGI文庫的第一引物和第一探針對(duì)所述陽性標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行熒光定量PCR檢測(cè)，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線；
（4）將利用含有引物和探針的組合物對(duì)所述待測(cè)高通量測(cè)序文庫進(jìn)行熒光定量PCR檢測(cè)得到的檢測(cè)值與所述標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比較，以便獲得所述待測(cè)高通量測(cè)序文庫的摩爾濃度定量結(jié)果；
所述含有引物和探針的組合物包括：檢測(cè)MGI文庫的第一引物和第一探針，和檢測(cè)所述擬南芥PHYA基因片段的第二引物和第二探針；
所述第一引物的序列如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示，所述第一探針的序列如SEQID NO:3所示；
所述第二引物的序列如SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5所示，所述第二探針的序列如SEQID NO:6所示；
所述第一探針和第二探針的5’端具有不同的熒光基團(tuán)修飾。
2.一種用于MGI平臺(tái)高通量測(cè)序文庫定量檢測(cè)的試劑盒，其特征在于，包括：
檢測(cè)MGI文庫的第一引物和第一探針，所述第一引物的序列如SEQ ID NO:1和SEQ IDNO:2所示，所述第一探針的序列如SEQ ID NO:3所示；
文庫稀釋液，所述文庫稀釋液中存在擬南芥PHYA基因片段，所述擬南芥PHYA基因片段如SEQ ID NO:7所示；
檢測(cè)擬南芥PHYA基因片段的第二引物和第二探針，所述第二引物的序列如SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5所示，所述第二探針的序列如SEQ ID NO:6所示；
所述第一探針和所述第二探針的5’端具有熒光基團(tuán)修飾，3’端具有淬滅基團(tuán)修飾；所述第一探針和第二探針的5’端具有不同的熒光基團(tuán)修飾；
進(jìn)一步包括：陽性標(biāo)準(zhǔn)品，所述陽性標(biāo)準(zhǔn)品為含有MGI文庫片段的質(zhì)粒，所述陽性標(biāo)準(zhǔn)品中所含有的MGI文庫片段序列如SEQ ID NO:8所示。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于，進(jìn)一步包括PCR反應(yīng)液，所述PCR反應(yīng)液為熒光定量PCR檢測(cè)試劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于，進(jìn)一步包括陰性對(duì)照品，所述的陰性對(duì)照品為無DNase/RNase水。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述陽性標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為0.01pM~100pM。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述第一引物的濃度為1-10μM，所述第一探針的濃度為1-10μM；
所述第二引物的濃度為1-10μM，所述第二探針的濃度為1-10μM。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述熒光基團(tuán)修飾選自FAM、VIC、CY5、ROX中的一種，所述淬滅基團(tuán)修飾為MGB。
8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述擬南芥PHYA基因片段的濃度為0.01-100pM。
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