[發明專利]一種鑒別粘蓋乳牛肝菌的核酸分子引物、方法及試劑盒

有效

• 申請號: 202110382675.7
• 申請日: 2021-04-09
• 公開（公告）號: CN113502344B
• 公開（公告）日: 2022-03-18
• 發明（設計）人: 陳佳佳;劉國華;宋杰;于健;陳義彬;楊廣榮
• 申請（專利權）人: 江蘇農林職業技術學院;中國林業科學研究院熱帶林業研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/686;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/645
• 代理公司: 廣州駿思知識產權代理有限公司 44425
• 代理人: 李國釗

1.一種鑒別粘蓋乳牛肝菌的方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1：提取粘蓋牛肝菌待測樣品DNA；

S2：以樣品DNA為PCR擴增的模板，用核酸分子引物作為擴增引物進行PCR擴增，所述核酸分子引物為：

C50F：5’-CTGTCGCAGATATAGATGTAGA-3’

C50R：5’-CTTGAGGAGCCAGAGTGT-3’；

S3：對步驟S2的PCR擴增產物進行瓊脂糖凝膠電泳檢測。

2.根據權利要求1所述的鑒別粘蓋乳牛肝菌的方法，其特征在于，步驟S2中的PCR擴增反應體系包括以下體積百分比的組分：

5U/μL Taq DNA聚合酶： 2%

10μmol/L上游引物C50F： 2%

10μmol/L下游引物C50R： 2%

10× Buffer： 10%

2 mmol/L dNTP： 10%

25 mmol/L MgCl₂： 6%

1-10μg/ml DNA模板： 2%

ddH₂O：余量。

3.根據權利要求2所述的鑒別粘蓋乳牛肝菌的方法，其特征在于，步驟S2中的PCR擴增反應體系的總體積為50 μL。

4.根據權利要求1所述的鑒別粘蓋乳牛肝菌的方法，其特征在于，步驟S2中的PCR擴增條件為：94℃預變性4min；94℃變性30s，50℃退火30s，72℃延伸60s，35個循環；最后72℃延伸10min，產物保存4℃保存備用。

5.根據權利要求1所述的鑒別粘蓋乳牛肝菌的方法，其特征在于，步驟S3中，若樣品的電泳結果中出現245 bp片段，則鑒定樣品為粘蓋乳牛肝菌。

6.PCR檢測試劑盒在鑒定粘蓋乳牛肝菌中的應用，其特征在于，所述試劑盒包括核酸分子引物C50F和C50R，其DNA序列為：

C50F：5’-CTGTCGCAGATATAGATGTAGA-3’

C50R：5’-CTTGAGGAGCCAGAGTGT-3’。

7.如權利要求6所述的應用，其特征在于，PCR擴增反應體系包括以下體積百分比的組分：

5U/μL Taq DNA聚合酶： 2%

10μmol/L上游引物C50F： 2%

10μmol/L下游引物C50R： 2%

10× Buffer： 10%

2 mmol/L dNTP： 10%

25 mmol/L MgCl₂： 6%

1-10μg/ml DNA模板： 2%

ddH₂O：余量。

8.如權利要求7所述的應用，其特征在于，PCR擴增反應體系的總體積為50μL。