[發明專利]一種基于磁性材料提取基因組DNA的試劑盒及應用方法

有效

• 申請號: 202110381929.3
• 申請日: 2021-04-09
• 公開（公告）號: CN113322253B
• 公開（公告）日: 2022-09-20
• 發明（設計）人: 丁利;王領娟;劉珍;田衍香
• 申請（專利權）人: 長沙理工大學
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 長沙啟昊知識產權代理事務所(普通合伙) 43266
• 代理人: 張海應

本發明提供了一種基于磁性材料提取基因組DNA的試劑盒及應用方法，該試劑盒包括裂解液、結合液、洗滌液、洗脫液和磁珠懸浮液；其中，所述磁珠懸浮液中的磁珠為Fe₃O₄@UiO?66復合材料；所述洗脫液為TE緩沖液；本發明選用Fe₃O₄@UiO?66復合材料作為DNA吸附材料，通過鋯離子與四氧化三鐵之間的相互作用形成具有孔隙的復合材料，通過孔隙吸附，在磁場作用下實現核酸分離，對核酸提取相關研究具有較大意義。本發明還提供了該試劑盒的應用方法，該方法具有成本低、提取效率高、提取的核酸純度高的特點，且不僅適用于細菌核酸提取，還可應用于其他病原微生物及生物組織核酸的提取。

技術領域

本發明涉及基因組DNA提取技術領域，更具體地，涉及一種基于磁性材料提取基因組DNA的試劑盒及應用方法。

背景技術

DNA提取的質量是進行生物檢測的基礎，關系到檢測以及科研方面的準確性與時效性。目前DNA提取的方法多采用傳統DNA提取方法，應用酚氯仿等有機溶劑進行提取，而酚氯仿存在毒害危險；采用過柱的方式提取DNA，雖然能夠得到一定純度的DNA溶液，但需要多次離心，且不能進行大批量樣本進行同時抽提；采用堿法提取細菌DNA，雖然方法簡單快速，但得到核酸純度和濃度都不高，難以達到檢測和科研的目的。

磁珠法是一種通過磁珠表面的孔徑吸附核酸并進行包裹，在磁力作用下將核酸與混合液分離的方法，該方法快速簡便，且所得核酸濃度相比其他的核酸提取技術相對要高。但現有的磁珠法，所使用的磁珠制備過程復雜，而且對DNA的提取效果不佳。

發明內容

基于現有技術中存在的上述技術問題，本發明的目的之一在于提供一種基于磁性材料提取細菌基因組DNA的試劑盒，使用該試劑盒可快速對生物樣本中多種細菌核酸進行提取，而且得到的核酸洗脫液可直接用于PCR或定量PCR技術檢測。

為了實現上述目的，本發明的技術方案如下：

一種基于磁性材料提取基因組DNA的試劑盒，包括裂解液、結合液、洗滌液、洗脫液和磁珠懸浮液；其中，所述磁珠懸浮液中的磁珠為Fe₃O₄@UiO-66復合材料；所述洗脫液為TE緩沖液。

在一些實施方式中，所述磁珠懸浮液中磁珠濃度為80-150mg/mL，磁珠大小為110-120nm。

在一些實施方式中，所述Fe₃O₄@UiO-66復合材料采用熱溶劑法制備，具體為：將四氧化三鐵、四氯化鋯和對苯二甲酸溶解在DMF中，再加入乙酸，混合均勻，然后在130～150℃下加熱進行反應，反應完成后，冷卻至室溫，用水和乙醇交替清洗，并干燥，即得Fe₃O₄@UiO-66復合材料。

在一些實施方式中，所述裂解液包括鹽酸胍、十六烷基三甲基溴化銨、二硫蘇糖醇、Triton-100和檸檬酸，所述裂解液pH6.0-7.0，鹽酸胍濃度為5-7.4mol/L。優選的，所述十六烷基三甲基溴化銨體積濃度為2-5％，Triton-100體積濃度為1-3％，檸檬酸濃度為20-35mmol/L，二硫蘇糖醇體積濃度為0.1-0.2％，其余為水。

在一些實施方式中，所述結合液包括異丙醇；所述洗滌液包括第一洗滌液和第二洗滌液，所述第一洗滌液包括鹽酸胍和乙醇，所述第二洗滌液包括乙醇；所述洗脫液包括Tris-HCl和EDTA。

在一些實施方式中，所述第一洗滌液中鹽酸胍濃度為3-5mol/L，乙醇和鹽酸胍按體積比1:1添加；所述第二洗滌液中，乙醇為80％乙醇；所述洗脫液中，Tris-HCl濃度為5-10mol/L，EDTA濃度為1.5-3.0mmol/L。

本發明的目的之二在于提供一種提取細菌基因組DNA的方法，該方法使用上述任一實施方式的試劑盒進行基因組DNA提取。