[發明專利]一種基于磁性材料提取基因組DNA的試劑盒及應用方法

有效

• 申請號: 202110381929.3
• 申請日: 2021-04-09
• 公開（公告）號: CN113322253B
• 公開（公告）日: 2022-09-20
• 發明（設計）人: 丁利;王領娟;劉珍;田衍香
• 申請（專利權）人: 長沙理工大學
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 長沙啟昊知識產權代理事務所(普通合伙) 43266
• 代理人: 張海應

1.一種基于磁性材料提取基因組DNA的試劑盒，其特征在于，包括裂解液、結合液、洗滌液、洗脫液和磁珠懸浮液；其中，所述磁珠懸浮液中的磁珠為Fe₃O₄@UiO-66復合材料；所述洗脫液為TE緩沖液；所述Fe₃O₄@UiO-66復合材料采用熱溶劑法制備，具體為：將四氧化三鐵、四氯化鋯和對苯二甲酸溶解在DMF中，再加入乙酸，混合均勻，然后在130~150℃下加熱進行反應，反應完成后，冷卻至室溫，用水和乙醇交替清洗，干燥，即得Fe₃O₄@UiO-66復合材料。

2.根據權利要求1所述的基于磁性材料提取基因組DNA的試劑盒，其特征在于，所述磁珠懸浮液中磁珠濃度為80-150mg/mL，磁珠大小為110-120nm。

3.根據權利要求1-2任一項所述的基于磁性材料提取基因組DNA的試劑盒，其特征在于，所述裂解液包括鹽酸胍、十六烷基三甲基溴化銨、二硫蘇糖醇、Triton-100和檸檬酸，所述裂解液pH6-7，鹽酸胍濃度為5-7.4mol/L。

4.根據權利要求1所述的基于磁性材料提取基因組DNA的試劑盒，其特征在于，所述結合液包括異丙醇；所述洗滌液包括第一洗滌液和第二洗滌液，所述第一洗滌液包括鹽酸胍和乙醇，所述第二洗滌液包括乙醇；所述洗脫液包括Tris-HCl和EDTA。

5.根據權利要求4所述的基于磁性材料提取基因組DNA的試劑盒，其特征在于，所述第一洗滌液中鹽酸胍濃度為3-5mol/L，乙醇和鹽酸胍按體積比1:1添加；所述第二洗滌液中，乙醇為80%乙醇；所述洗脫液中，Tris-HCl濃度為5-10mol/L，EDTA濃度為1.5-3.0mmol/L。

6.一種提取基因組DNA的方法，其特征在于，包括使用權利要求1-5任一項所述的試劑盒進行基因組DNA提取。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，具體包括以下步驟：

S1、將菌液進行離心分離，去除上層清液，留下菌體；

S2、在所述菌體中加入所述裂解液和蛋白酶K，進行裂解和酶解；

S3、接著加入所述磁珠懸浮液和結合液，振蕩，去除裂解混合物；

S4、加入第一洗滌液或第二洗滌液，振蕩，靜置，去除上層清液；再加入第二洗滌液或第一洗滌液，振蕩，靜置，去除上清液；

S5、最后加入洗脫液，振蕩，靜置，轉移洗脫液，得到含有核酸的洗脫液，即為核酸溶液。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，步驟S2中，所述裂解液、所述菌液和所述蛋白酶K的體積比為（30~35）：20:2；步驟S3中，所述磁珠懸浮液和所述結合液的體積比為（30~20）：1；步驟S4中，所述第一洗滌液和第二洗滌液與所述裂解液的體積比分別為（1~7）：（2~12）；步驟S5中，所述洗脫液與步驟S1的所述菌液的體積比為（1~4）：（2~5）。

9.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、將細菌和培養液混合，在1000r/min的速度下離心分離60s，去除上層細菌培養液，留下底部細菌菌體；

S2、向步驟S1所得菌體中加入裂解液和蛋白酶K，充分混勻，在56℃條件下孵育20-30min，得到菌液；

S3、將裂解后所得的菌液加入到96孔板的第1列和第7列中，第2列和第8列中加入磁珠懸浮液和無菌水或超純水，在第3列和第9列加入第一洗滌液，第4列、第5列、第10列和第11列加入第二洗滌液，第6列和第12列加入洗脫液；

S4、將所述96孔板放入到核酸自動提取機中提取，等待程序運行結束后得到含有細菌核酸的洗脫液，即為核酸溶液。

10.根據權利要求9所述的方法，其特征在于，步驟S3中，所述磁珠懸浮液與超純水或無菌水的體積比為10-20μL：400-500μL，所述第一洗滌液和第二洗滌液均為500-750μL，所述洗脫液為80-100μL。