[發(fā)明專利]一種病毒VP2蛋白分離純化的規(guī)模化生產(chǎn)方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110381614.9
• 申請日: 2021-04-09
• 公開（公告）號: CN113061166B
• 公開（公告）日: 2022-04-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王青竹;鞠妍;高宏雷;劉景利;王曉龍;張峣;孫振峰;朱慶虎;王子敬;牛卉穎
• 申請（專利權(quán)）人: 哈爾濱維科生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C07K14/08
• 分類號: C07K14/08;C07K1/14;C07K1/34
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠(yuǎn)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 23211
• 代理人: 鄧宇

1.一種病毒VP2蛋白分離純化的規(guī)模化生產(chǎn)方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

步驟一、表達(dá)法氏囊病病毒的VP2基因的大腸桿菌菌體經(jīng)裂解液重懸、高壓勻質(zhì)機(jī)破碎及離心后獲得菌液；

步驟二、將步驟一獲得的菌液放入超濾孔徑的中空纖維柱中，在封閉透出端后，進(jìn)行反復(fù)沖刷，然后打開透出端，調(diào)整流速，將柱內(nèi)體積濃縮至原體積的1/5-1/10后關(guān)閉透出端；

步驟三、向柱內(nèi)加入等體積的PB緩沖液，關(guān)閉透出端，柱內(nèi)循環(huán)15min-30min，打開透出端，將菌液體積再次濃縮至加入緩沖液之前的體積，然后用PB緩沖液對菌液進(jìn)行連續(xù)洗濾，直至透出端廢液體積達(dá)到罐內(nèi)液體體積的4-8倍；

步驟四、向步驟三獲得的菌液中加入等體積的含有脫氧膽酸鈉和氯化鈉的混合液，調(diào)節(jié)pH至7.0-7.5，關(guān)閉透出端閥門，柱內(nèi)循環(huán)15min-30min，然后用含有脫氧膽酸鈉和氯化鈉的PB緩沖液對菌液進(jìn)行連續(xù)洗濾，直至透出端廢液體積達(dá)到罐內(nèi)液體體積的5-10倍完成整個(gè)工藝流程；所述含有脫氧膽酸鈉和氯化鈉的混合液中，脫氧膽酸鈉的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1％-2％，氯化鈉的濃度為1M；所述含有脫氧膽酸鈉和氯化鈉的PB緩沖液中，脫氧膽酸鈉的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5％-1％，氯化鈉的濃度為0.5M。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟一所述裂解液為0.1mol/L-0.3mol/L的PB緩沖液，大腸桿菌菌體濕菌重與裂解液的體積比為1:10。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟一所述破碎的壓力為800bar，重復(fù)3次。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟一所述離心為用碟片離心機(jī)離心，轉(zhuǎn)速為10000r/min。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟三所述連續(xù)洗濾的方法為將PB緩沖液勻速加入罐內(nèi)，打開透出端閥門，將透出端流速調(diào)節(jié)至與緩沖液注入速度相同，將進(jìn)口端壓力控制在6psi-12psi。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟四所述連續(xù)洗濾的方法為將含有脫氧膽酸鈉和氯化鈉的PB緩沖液勻速加入柱內(nèi)，打開透出端閥門，將透出端流速調(diào)節(jié)至與緩沖液注入速度相同，將進(jìn)口端壓力控制在6psi-12psi。