[發明專利]一種前脂肪細胞的分離方法

在審

• 申請號: 202110381028.4
• 申請日: 2021-04-09
• 公開（公告）號: CN113174367A
• 公開（公告）日: 2021-07-27
• 發明（設計）人: 萬榮
• 申請（專利權）人: 百色學院
• 主分類號: C12N5/077
• 分類號: C12N5/077
• 代理公司: 北京邦中知識產權代理有限公司 11827
• 代理人: 付佳

本發明涉及一種前脂肪細胞的分離方法，具體地，本發明提供一種前脂肪細胞的制備方法，所述的方法包括步驟：(1)將脂肪與Ⅰ型膠原酶溶液混合后進行孵育消化，得到消化液；(2)所述的消化液經中和液中和后，過濾，得到濾液；(3)所述濾液經離心后，收集沉淀，得到前脂肪細胞。本發明所述的方法制備的前脂肪細胞活性強，體外培養的生長曲線類似S型，符合體外培養細胞的正常生長增殖規律，經連續傳代后，染色體倍性正常，保留正常細胞的基本遺傳特征，且經誘導分化后具有優異的體外成脂能力。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種前脂肪細胞的分離方法。

背景技術

脂肪細胞是由起源于中胚層的多能性間充質干細胞(mesenchymal stem cell,MSC)逐步分化、發育而來，其分化發育過程大致為：①MSC向脂肪細胞定向分化，形成脂肪母細胞(adipoblast)；②脂肪母細胞途經生長抑制和細胞增殖，形成前脂肪細胞(preadipocyte)；③前脂肪細胞經過生長抑制、細胞增殖和一系列基因表達的變化，形成多室脂肪細胞(multilocular cell)，內含大量小脂滴；④多室脂肪細胞隨著脂類在細胞中的沉積，小脂滴逐漸匯集成大脂滴并充滿脂肪細胞的大部分，形成單室脂肪細胞(unilocularcell)，便是成熟的脂肪細胞。

前脂肪細胞(Preadipocytes)經誘導后能在胞漿內聚積脂滴而分化為成熟的脂肪細胞。前脂肪細胞不僅能夠用于研究脂肪發育和脂肪沉積的機制，還可以應用于人類醫學領域的整形科的技術開發，例如前脂肪細胞用于脂肪組織的獲取與純化后，用于美容。

現有技術中，常常從脂肪組織中提取前脂肪細胞，然而，現有的前脂肪細胞提取方法存在許多缺點，例如，提取獲得的前脂肪細胞活性差，體外生長慢，不符合體外培養細胞的正常生長增殖規律，經過連續傳代后，染色體倍性異常，難以保留正常細胞的基本遺傳特征，經誘導分化后成脂能力差等。因此，如何開發一種具有活性強，經過傳代培養后保留正常細胞的基本遺傳特征和誘導成脂能力的前脂肪細胞制備方法成為當今研究的熱點。

因此，本領域需要開發一種具有活性強，經過傳代培養后保留正常細胞的基本遺傳特征和誘導成脂能力的前脂肪細胞制備方法。

發明內容

本發明的目提供一種具有活性強，經過傳代培養后保留正常細胞的基本遺傳特征和誘導成脂能力的前脂肪細胞制備方法。

本發明第一個方面提供一種前脂肪細胞的制備方法，所述的方法包括步驟：

(1)將脂肪與Ⅰ型膠原酶溶液混合后進行孵育消化，得到消化液；

(2)所述的消化液經中和液中和后，過濾，得到濾液；

(3)所述濾液經離心后，收集沉淀，得到前脂肪細胞。

優選地，所述的前脂肪細胞選自下組：肌內前脂肪細胞、皮下前脂肪、內臟前脂肪細胞，或其組合。

優選地，所述的步驟(1)中，所述的脂肪來源人或非人哺乳動物。

優選地，所述的非人哺乳動物為牛、羊、狗、豬、馬、兔或貓。

優選地，所述的步驟(1)中，所述的脂肪選自下組：肌內脂肪、皮下脂肪、內臟脂肪，或其組合。

優選地，所述的步驟(1)中，所述的脂肪包括粉碎(或剪碎)后的脂肪。

另一優選例中，所述粉碎后的脂肪包括脂肪塊。

優選地，所述脂肪塊大小為0.2-2mm³，較佳地0.5-1.5mm³，較佳地0.8-1.2mm³，較佳地1mm³。

優選地，所述的步驟(1)中，所述的脂肪與所述Ⅰ型膠原酶溶液的重量比為0.5-1.5:0.5-1.5，較佳地0.8-1.2:0.8-1.2，更佳地1:1。