[發明專利]一種復合微生物制劑及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202110374152.8
• 申請日: 2021-04-07
• 公開（公告）號: CN113073062B
• 公開（公告）日: 2023-03-31
• 發明（設計）人: 龍章德;薛云;李季剛;魏濤;劉啟斌;劉鴻;孫建生;寧振興;蘇贊;胡志忠;毛多斌
• 申請（專利權）人: 廣西中煙工業有限責任公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/16;A24B15/20;A24B15/18;C12R1/865;C12R1/01
• 代理公司: 北京三聚陽光知識產權代理有限公司 11250
• 代理人: 李紅團

1.一種復合微生物制劑，其特征在于，包含釀酒酵母和嗜麥芽寡養單胞菌；釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)和嗜麥芽寡養單胞菌(Stenotrophomonas maltophilia₎的活菌數比為1：2至2：1；

所述嗜麥芽寡養單胞菌(Stenotrophomonas maltophilia₎為中國普通微生物菌種保藏管理中心保藏的保藏編號為CGMCC NO.13905的菌株。

2.根據權利要求1所述的復合微生物制劑，其特征在于，釀酒酵母和嗜麥芽寡養單胞菌的活菌數比為1：1。

3.一種制備權利要求1-2任一所述的復合微生物制劑的方法，其特征在于，所述復合微生物制劑的制備方法包括如下步驟：

(1)制備發酵液，將活化后的釀酒酵母和嗜麥芽寡養單胞菌分別接種到發酵培養基中發酵制備得到發酵液；

(2)將兩株菌的發酵液復配。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述步驟(2)具體包括如下步驟：將發酵液離心，除去上清液，收集濕菌體，重懸菌體得菌液，按比例將兩株菌的菌液進行復配。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，還包括菌種活化培養的步驟：分別挑取釀酒酵母和嗜麥芽寡養單胞菌菌株，接種到活化培養基中進行活化，即得活化后的釀酒酵母和嗜麥芽寡養單胞菌；

所述活化培養基為PDA培養基；活化培養時間為12h至72h；

步驟(1)中，釀酒酵母發酵培養基含有：K₂HPO₄ 1g/L，MgSO₄·7H₂O0.5g/L，KCl 0.5g/L，NaNO₃ 3g/L，FeSO₄·7H₂O 0.01g/L，蔗糖30g/L；嗜麥芽寡養單胞菌發酵培養基含有：KNO₃1.0g/L，KH₂PO₄ 0.5g/L，NaCl0.5g/L，MgSO₄·7H₂O 0.5g/L，FeSO₄·7H₂O 0.01g/L，麥芽糖1g/L；所述的發酵條件為：在25℃至35℃、150-200rpm發酵12至36小時。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，離心條件為：8000rpm-12000rpm；離心時間為5至15min。

7.根據權利要求4至6任一項所述的方法，其特征在于，步驟(2)中菌液復配的具體步驟為：調節兩菌株菌液中的菌體濃度一致，然后將兩種菌液按體積比為1：2至2：1的比例進行復配，即得復合微生物制劑。

8.如權利要求7所述的方法，其特征在于，調節后兩菌株的菌液OD₆₀₀均為0.8或調節后兩菌株菌液中菌體濃度為10⁶cfu/ml。

9.權利要求1或2所述的復合微生物制劑，或權利要求3-8任一項所述方法制備得到的復合微生物制劑在煙葉發酵和/或提高煙葉的香氣品質中的應用。

10.根據權利要求9所述的應用，其特征在于，按煙葉與復合微生物制劑的比為20g：1ml至5g：1ml，將復合微生物制劑均勻噴灑至煙葉表面；所述煙葉為復烤后煙葉；煙葉等級為如下任一一種：

1)上部煙葉；

2)中部煙葉；

3)下部煙葉；

4)包含上述1)-3)中任意2種或2種以上的混合等級煙葉。

11.根據權利要求10所述的應用，其特征在于，煙葉噴灑微生物制劑后，放置于25℃-35℃、發酵12小時-48小時。