[發(fā)明專利]一種1-磺酸基-異吲哚半抗原、抗原和抗體及其制備方法與應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110373358.9
• 申請(qǐng)日: 2021-04-07
• 公開（公告）號(hào): CN113087653B
• 公開（公告）日: 2022-03-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 羅林;林詩(shī)淇;徐振林;孫遠(yuǎn)明;肖治理;沈玉棟;雷紅濤
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C07D209/44
• 分類號(hào): C07D209/44;C07K14/47;C07K14/765;C07K14/77;C07K16/44;G01N33/543
• 代理公司: 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司 44102
• 代理人: 劉春風(fēng)

本發(fā)明提供一種1?磺酸基?異吲哚半抗原、人工抗原、抗體及其制備與應(yīng)用。一種1?磺酸基?異吲哚半抗原，其結(jié)構(gòu)式如式(Ⅰ)所示：其中，R為—(CH₂)_n—，其中n＝1～6。本發(fā)明通過將亞硫酸鹽與鄰苯二甲醛衍及一定碳鏈長(zhǎng)度的脂肪族氨基酸生反應(yīng)，在半抗原結(jié)構(gòu)中引入芳香環(huán)結(jié)構(gòu)(吲哚環(huán))同時(shí)保留了亞硫酸鹽的特征結(jié)構(gòu)磺酸基，有利于刺激動(dòng)物免疫應(yīng)答產(chǎn)生特異性更強(qiáng)、靈敏度更高的抗體。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于食品安全免疫檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，更具體地，涉及一種1-磺酸基-異吲哚的半抗原、人工抗原和抗體及其制備方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)

亞硫酸鹽是一類很早即在世界范圍內(nèi)廣泛使用的食品添加劑，可作為食品漂白劑，防腐劑；可抑制非酶褐變和酶促褐變，防止食品褐變，使水果不至黑變，還能防止鮮蝦生成黑斑；在酸性介質(zhì)中，還是十分有效的抗菌劑。同時(shí)，在發(fā)酵食品與腐敗食品中，亞硫酸鹽的含量非常高。

在人體內(nèi)，亞硫酸離子本來就是含硫氨基酸代謝過程中的產(chǎn)物，因而，機(jī)體內(nèi)存在能使其氧化的亞硫酸氧化酶,亞硫酸氧化酶在肝臟中最多，其他各種器官中也有分布，是人體必不可少的一種酶。進(jìn)入機(jī)體的亞硫酸鹽，經(jīng)亞硫酸氧化酶催化，與氧結(jié)合生成無毒害的SO₄^2-。人一天攝入1g亞硫酸鹽時(shí)不會(huì)明顯危害，攝入4～6g可造成胃腸障礙，引起劇烈腹瀉。慢性中毒，可引起頭疼，腎臟障礙，紅血球和血紅蛋白減少等癥狀。同時(shí)，食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)也對(duì)亞硫酸鹽的殘留量做出了要求，GB 2760中指出不同類型食品的亞硫酸鹽最大殘留限量在0.01～0.4g/kg之間。

目前，亞硫酸鹽的監(jiān)測(cè)，主要依賴?yán)砘治龇椒ǎ缰泻偷味ǚā⒅亓糠ā岫确āⅪ}酸副玫瑰苯胺比色法等。這些方法的檢出限主要在0.3-3.0mg/kg之間，雖然檢測(cè)操作較為簡(jiǎn)單，但是只能滿足單個(gè)樣品檢測(cè)，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，不適宜大批量的快速篩選，因此，需發(fā)明一種針對(duì)亞硫酸鹽的快速、簡(jiǎn)便的檢測(cè)方法。而且，目前尚無可用于免疫檢測(cè)亞硫酸鹽的半抗原、抗原和抗體的相關(guān)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有的亞硫酸鹽檢測(cè)技術(shù)的缺陷與不足，提供了一種亞硫酸鹽衍生物—1-磺酸基-異吲哚的半抗原及其相應(yīng)的人工抗原和抗體及其制備方法。

本發(fā)明的另一目的在于提供了所述半抗原、人工抗原和抗體的應(yīng)用。

本發(fā)明的另一目的在于提供一種檢測(cè)亞硫酸鹽的免疫分析方法。

本發(fā)明的上述目的是通過以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)的。

第一方面，一種1-磺酸基-異吲哚半抗原，其特征在于，其結(jié)構(gòu)式如式(Ⅰ)所示：

其中，R為—(CH₂)_n—，其中n＝1～6。

第二發(fā)明，一種1-磺酸基-異吲哚半抗原的制備方法，包括如下步驟：將鄰苯二甲醛和亞硫酸鈉與式(II)所示的氨基酸在室溫條件下于弱酸性環(huán)境中進(jìn)行反應(yīng)后得到1-磺酸基-異吲哚半抗原；其中，

H₂N-R-COOH

式(II)

其中，R為—(CH₂)_n—，其中n＝1～6。

在本發(fā)明中，所述1-磺酸基-異吲哚半抗原的制備方法具體包括以下步驟：將鄰苯二甲醛溶于無水乙醇，無水亞硫酸鈉溶于一級(jí)水，式(II)所示的氨基酸溶于一級(jí)水，其中鄰苯二甲醛：式(II)所示氨基酸：無水亞硫酸鈉的摩爾比為1：1：1.2；將三份溶液依次加入到pH＝6.6的磷酸二氫鈉-氫氧化鈉緩沖溶液中，室溫磁力攪拌反應(yīng)10min，減壓蒸餾除去反應(yīng)液中的乙醇，冷凍干燥，即得1-磺酸基-異吲哚半抗原。

第三方面，一種1-磺酸基-異吲哚人工抗原，其結(jié)構(gòu)式如式(III)所示：