[發(fā)明專利]一種1-磺酸基-異吲哚半抗原、抗原和抗體及其制備方法與應(yīng)用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202110373358.9 | 申請日： | 2021-04-07 |
| 公開（公告）號： | CN113087653B | 公開（公告）日： | 2022-03-25 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 羅林;林詩淇;徐振林;孫遠明;肖治理;沈玉棟;雷紅濤 | 申請（專利權(quán)）人： | 華南農(nóng)業(yè)大學(xué) |
| 主分類號： | C07D209/44 | 分類號： | C07D209/44;C07K14/47;C07K14/765;C07K14/77;C07K16/44;G01N33/543 |
| 代理公司： | 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102 | 代理人： | 劉春風(fēng) |
| 地址： | 510642 廣東省*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 磺酸基 吲哚 半抗原 抗原 抗體 及其 制備 方法 應(yīng)用 | ||
1.一種1-磺酸基-異吲哚人工抗原，其特征在于，其結(jié)構(gòu)式如式（III）所示：
式（III）；
其中，R為—（CH2）n—，其中n =3；載體蛋白為乳鐵蛋白、雞卵清白蛋白。
2.權(quán)利要求1所述的1-磺酸基-異吲哚人工抗原的制備方法，其特征在于，其包括如下步驟：
將1-磺酸基-異吲哚半抗原溶于MES水溶液中，加入EDC和NHS室溫避光攪拌，反應(yīng)結(jié)束后轉(zhuǎn)移至冰浴，將載體蛋白溶解后加入，攪拌均勻，室溫偶聯(lián)過夜；偶聯(lián)混合物低溫下PBS透析數(shù)天，得到所述1-磺酸基-異吲哚人工抗原；所述半抗原與載體蛋白的摩爾比為 30~300：1；
其中，一種1-磺酸基-異吲哚半抗原，其結(jié)構(gòu)式如式（Ⅰ）所示：
其中，R為—（CH2）n—，其中n = 3；載體蛋白為乳鐵蛋白、雞卵清白蛋白。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述人工抗原的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
S11.將載體蛋白溶解于2~10mL的pH=9.6的 CB緩沖液中；
S12.取7~37 mg的1-磺酸基-異吲哚半抗原溶解于0.1M MES水溶液中；
S13.將7~37mg的EDC和5~23mg的NHS加入到S12的半抗原溶解液中，室溫避光反應(yīng)4h形成活潑酯；
S14.將活潑酯滴加到 S11的載體蛋白溶液中，室溫避光偶聯(lián)過夜；
S15.反應(yīng)完成后，將偶聯(lián)混合物于4℃下，用PBS透析3天，得到1-磺酸基-異吲哚人工抗原。
4.權(quán)利要求1所述1-磺酸基-異吲哚人工抗原在間接檢測亞硫酸鹽中的應(yīng)用。
5.一種間接檢測亞硫酸鹽的免疫分析方法，具體包括如下步驟：
S31.將權(quán)利要求1中式（III）所示的1-磺酸基-異吲哚人工抗原免疫動物制備亞硫酸鹽的多克隆抗體，其中載體蛋白為乳鐵蛋白；
S32.將權(quán)利要求1中式（III）所示的1-磺酸基-異吲哚人工抗原作為包被原包被在微孔板上，其中載體蛋白為雞卵清白蛋白，然后將步驟S31制備得到亞硫酸鹽的多克隆抗體加入微孔板中；
S33.加入衍生后的待測樣品，采用競爭ELISA間接測定待測樣品中亞硫酸鹽的含量。
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