[發明專利]一種多肽中測定N,N-二異丙基碳二亞胺含量的氣相分析方法

有效

• 申請號: 202110373055.7
• 申請日: 2021-04-07
• 公開（公告）號: CN113092646B
• 公開（公告）日: 2023-07-14
• 發明（設計）人: 王平;凌振宏;柴洪帆;吳春暖;朱云貴
• 申請（專利權）人: 海南中和藥業股份有限公司
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/30
• 代理公司: 北京華科聯合專利事務所(普通合伙) 11130
• 代理人: 王為;李旭

本發明涉及分析化學領域，具體涉及一種多肽中測定N,N二異丙基碳二亞胺含量的氣相分析方法。本發明的分析方法具有靈敏度高、穩定性好等特點。該方法包括以下步驟：1)取待測多肽樣品，加入堿性溶劑使其溶解后，用有機溶劑制備待測樣品；2)取待測多肽樣品，加入堿性溶劑使其溶解后，再加入用有機溶劑和混合溶劑溶解后的N,N二異丙基碳二亞胺對照品貯備液，以制備待測對照品溶液；3)采用氣相色譜法對上述溶液進行檢測，4)按標準加入法計算被測樣品中N,N二異丙基碳二亞胺的含量。

技術領域

本發明涉及分析化學領域，具體涉及一種多肽中測定N,N-二異丙基碳二亞胺含量的氣相分析方法。

背景技術

胸腺法新是適用于治療慢性乙型肝炎，可作為免疫損害病者的疫苗免疫應答增強劑，為化學合成的由二十八個氨基酸組成的多肽，為N-乙?；?L-絲氨酰-L-α-天冬氨酰-L-丙氨酰-L-丙氨酰-L-纈氨酰-L-α天冬氨酰-L-蘇氨酰-L-絲氨酰-L-絲氨酰-L-α谷氨酰-L-異亮氨酰-L-蘇氨酰-L-蘇氨酰-L-賴氨酰-L-α-天冬氨酰-L-亮氨酰-L-賴氨酰-L-α-谷氨酰-L-賴氨酰-L-賴氨酰-L-α-谷氨酰-L-纈氨酰-L-纈氨酰-L-α-谷氨酰-L-α-谷氨酰-L-丙氨釀-L-α-谷氨酰-L-天冬酰胺，注射用胸腺法新通過刺激外周血液淋巴細胞絲裂原來促進T淋巴細胞的成熟，增加抗原或絲裂原激活后T細胞分泌的干擾素、干擾素以及白介素2、白介素3等淋巴因子水平，同時增加T細胞表面淋巴因子受體水平，還可通過對CD4細胞的激活，增強異體和自體的人類混合淋巴細胞反應。

多肽在合成過程中經常使用到N,N-二異丙基碳二亞胺作為縮合劑。如胸腺法新合成中就使用到了N,N-二異丙基碳二亞胺。此外在生長抑素、加壓素等多肽的合成中同樣使用了N,N-二異丙基碳二亞胺。上述藥品中使用了N,N-二異丙基碳二亞胺的，均有殘留的可能，且N,N-二異丙基碳二亞胺在歐洲藥典給出的基因毒性雜質之警示結構一文中明確指出了N,N-二異丙基碳二亞胺具有基因毒性雜質警示結構，是一個潛在的基因毒性雜質，在藥品中是要嚴格控制其殘留量。所以建立一種檢測N,N-二異丙基碳二亞胺的方法，完善多肽的質量控制，對于提升胸腺法新等多肽質量，減少患者用藥風險，是非常有必要的。

目前各國藥典均未收載N,N-二異丙基碳二亞胺的有效測定方法，相關文獻記載了N,N-二異丙基碳二亞胺的檢測方法，如深圳翰宇藥業股份有限公司、一種測定N,N-二異丙基碳二亞胺的方法(專利號CN201510148254.2)，馬慶華等人、多糖蛋白結合疫苗中殘余碳二亞胺(EDAC)的檢測方法的建立(第五次全國免疫診斷暨疫苗學術研討會)，但是上述方法采用了液質聯用的方式進行測定，該方法需要購買價格高昂的質譜，對于大多數企業而言，操作繁瑣、實用性不強。

因此，建立一套操作簡單，定量準確并且實用的定量分析方法、以測定多肽產品中N,N-二異丙基碳二亞胺的含量，特別是胸腺法新產品中N,N-二異丙基碳二亞胺的含量是非常有必要的，這有助于提高用藥的安全性。

發明內容

針對以上技術情況，本發明提供一種測定N,N-二異丙基碳二亞胺含量的氣相分析方法，特別是胸腺法新中N,N-二異丙基碳二亞胺含量的氣相分析方法。本發明方法包括以下步驟：

一種多肽中測定N,N-二異丙基碳二亞胺含量的氣相分析方法，包括以下步驟：

1)取N,N-二異丙基碳二酰亞胺適量，用有機溶劑和混合溶劑稀釋至一定濃度，作為對照品貯備液；取待測多肽樣品，加入堿性溶劑使其溶解后，再加入適量對照品貯備液，混勻并用混合溶劑稀釋至一定濃度，作為對照品溶液；

2)取待測多肽樣品適量，加入堿性溶劑使其溶解后，再用混合溶劑進行稀釋，作為供試品溶液；

3)采用氣相色譜法對上述溶液進行檢測，其中氣相色譜條件為：

色譜柱：以100％二甲基聚硅氧烷為固定相的色譜柱或性質相同、相似的其他色譜柱；