[發明專利]高速逆流色譜分離純化何首烏葉乙酸乙酯相中黃酮類化合物的方法

有效

• 申請號: 202110372815.2
• 申請日: 2021-04-07
• 公開（公告）號: CN113402574B
• 公開（公告）日: 2023-03-14
• 發明（設計）人: 吳磊;吳靜;謝傳奇;徐敢珍;熊偉;曹明源
• 申請（專利權）人: 江西省科學院應用化學研究所;江西新世嘉農業科技有限公司
• 主分類號: C07H17/07
• 分類號: C07H17/07;C07H1/08
• 代理公司: 南昌豐擇知識產權代理事務所(普通合伙) 36137
• 代理人: 吳稱生

本發明涉及高速逆流色譜分離純化何首烏葉中黃酮類化合物的方法，包括以下步驟：(1)何首烏葉乙酸乙酯相的制備(2)采用體積比為1:1:1:0.5～2:2:5:1的水?甲醇?乙酸乙酯?正己烷溶液為溶劑體系，將固定相、流動相泵入高速逆流色譜儀；待兩相溶劑體系在高速逆流柱中達到平衡時，將所述何首烏葉乙酸乙酯相溶于所述兩相溶劑體系，進行高速逆流色譜分離；在所述高速逆流色譜分離時，紫外檢測器檢測波峰，從出峰開始進行收集直至峰消失為止停止收集，分別收集不同餾分進行減壓濃縮冷凍干燥，得到楊梅苷、槲皮苷、山柰酚?3?O?鼠李糖苷。本發明分離純化黃酮類化合物單體純度高、損失小、操作簡單、制備量大、經濟環保。

技術領域

本發明涉及天然產物化學領域，尤其涉及高速逆流色譜分離純化何首烏葉乙酸乙酯相中黃酮類化合物的方法。

背景技術

何首烏(Polygonum multiflorum Thunb.)，又名夜交藤，首烏藤，為蓼科(Polygonaceae)何首烏屬(Fallopia Adans.)多年生草本植物何首烏的干燥塊莖。在《本草綱目》、《中國藥典》上均有收錄記載，《本草綱目》曰“性甘、平；歸心、肝經。具有養血安神、祛風通絡的功效。用于失眠多夢、血虛身痛、風濕痹痛、皮膚瘙癢等癥。”研究表明：何首烏中含有多種生物活性類物質，其中最主要的包括黃酮類化合物、二苯乙烯苷類化合物、蒽醌類化合物、多酚類化合物和磷脂類及脂肪酸類等活性成分。現代藥理研究表明，何首烏具有鎮靜安神、抗慢性炎癥及抗菌等作用，其中的黃酮類化合物也有著抗氧化、抗衰老、抗癌和降三高的作用。

國內外學者對何首烏化學成分的研究多集中在其塊根和藤莖上，并得出何首烏塊根和藤莖中含有大量的黃酮類化合物、二苯乙烯苷類化合物、多酚類化合物、蒽醌類化合物和磷脂類及脂肪酸類等化學活性成分[何首烏化學成分與藥理作用研究進展，中國實驗方劑學雜志，2019年第13期]，但在何首烏除去塊根藤莖之后，對其剩余部分的研究較少(僅有饒高雄等[首烏葉化學成分研究，中藥材，2009年第6期]對何首烏葉進行化學成分研究，并分離得到黃酮類和甾體及其苷類等化合物。現有的分離技術中一般采用傳統柱層析分離，重結晶等方法從何首烏樣品中提取分離單體化合物，這些方法需反復經過柱層析分離，操作復雜，耗時長，不僅溶劑消耗量大，而且樣品損失也大，分離效果差。高速逆流色譜是近年來新興的一種快速分離色譜分離技術，無需固定相為載體是其最大優勢，同時具有溶劑用量少、分離速度快、進樣量大、樣品回收率高等獨特優點，現已廣泛應用于植物化學、中藥化學以及天然產物化學物質的制備分離和純化。

發明內容

本發明的目的是提供一種高速逆流色譜分離純化何首烏葉乙酸乙酯相中黃酮類化合物的方法，可以從何首烏葉乙酸乙酯相中分離純化多個黃酮類化合物單體。

為了解決上述技術問題，本發明是這樣實現的：

高速逆流色譜分離純化何首烏葉乙酸乙酯相中黃酮類化合物的方法，包括以下步驟：

(1)何首烏葉乙酸乙酯相的制備

將何首烏葉干燥后，以乙醇為溶劑進行超聲提取1～3次，提取時間為1～4h，超聲提取的固液比為1：10～1：20，之后抽濾并合并濾液，進行真空減壓濃縮除去溶劑，得到何首烏葉乙醇提取物，之后加入乙酸乙酯和水進行多次萃取，將萃取完全后的乙酸乙酯相進行真空減壓濃縮去溶劑，得到何首烏葉乙酸乙酯相；

(2)高速逆流色譜分離純化