[發(fā)明專利]M2型骨髓巨噬細胞外泌體及其應用、脊髓損傷治療制劑

有效

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• 申請日: 2021-04-07
• 公開（公告）號: CN113046316B
• 公開（公告）日: 2022-11-22
• 發(fā)明（設計）人: 羅子翔;彭偉;曹勇;胡建中;段春岳;吳天定;許琰;謝勇;劉煜東
• 申請（專利權）人: 中南大學湘雅醫(yī)院
• 主分類號: C12N5/0786
• 分類號: C12N5/0786;A61K35/15;A61L26/00;A61P17/02;A61P25/00
• 代理公司: 長沙市融智專利事務所(普通合伙) 43114
• 代理人: 袁靖

本發(fā)明公開了一種M2型骨髓巨噬細胞外泌體及其應用、脊髓損傷治療制劑，屬于脊髓損傷治療技術領域。本發(fā)明高表達OTULIN蛋白的M2型骨髓巨噬細胞外泌體可以發(fā)揮改善脊髓損傷后局部缺血缺氧環(huán)境，促進血管再生的作用，更加利于神經(jīng)再生以及局部組織的存活。通過與光固化水凝膠結合形成外泌體緩釋系統(tǒng)應用于脊髓損傷局部，提高了外泌體治療效率，避免了被肝腎代謝，并可持續(xù)緩釋實現(xiàn)長時間作用，顯著改善了小鼠脊髓損傷后的功能恢復。

技術領域

本發(fā)明屬于脊髓損傷治療技術領域，具體涉及一種M2型骨髓巨噬細胞外泌體及其應用、脊髓損傷治療制劑。

背景技術

脊髓損傷是一種嚴重的中樞神經(jīng)系統(tǒng)創(chuàng)傷性疾病，全球發(fā)病率為每年每百萬人口15-40例，中國現(xiàn)有創(chuàng)傷性脊髓損傷患者超過200萬，每年新增10-14萬，高于全球發(fā)病率。脊髓是大腦和外周神經(jīng)系統(tǒng)之間信息溝通的主要橋梁，損傷發(fā)生后將導致其運動、感覺和自主神經(jīng)功能喪失，往往嚴重致殘，甚至引起死亡，不僅消耗巨大的醫(yī)療資源，也給個人、家庭和社會帶來沉重的經(jīng)濟負擔。目前對于伴有嚴重神經(jīng)功能障礙的患者仍無有效的治療方法。

外泌體是細胞分泌的外囊泡，其中包含多種不同的蛋白質(zhì)和miRNAs，這些貨物被輸送到周圍細胞或攜帶到遠端細胞，以調(diào)節(jié)生物過程。不同細胞來源的外泌體，其作用也不盡相同。外泌體治療具有諸多優(yōu)勢，良好的生物相容性、特異的靶向性以及低免疫原性使其成為良好的治療載體，目前外泌體治療的巨大潛力已引起了人們的極大關注，選擇合適的細胞來源以獲得相應的外泌體顯得尤為重要。針對脊髓損傷治療的外泌體主要來源于不同類型的干細胞，通過干細胞外泌體的促神經(jīng)再生作用在一定程度上改善脊髓損傷后功能恢復，但是神經(jīng)的再生與局部微環(huán)境密切相關，在局部缺血缺氧的情況下其再生能力也往往受限，目前尚無以針對脊髓損傷后血管再生治療為主的外泌體產(chǎn)品。

此外，系統(tǒng)性注射的外泌體往往會隨血液到達肝腎，并被代謝，僅有少部分到達目標部位發(fā)揮治療作用，局部外泌體給藥僅能在早期維持較高效應濃度，難以長期持續(xù)性發(fā)揮效應。

綜上，目前仍缺乏一種針對脊髓損傷后促進血管再生的外泌體，并且利用該種外泌體進行持續(xù)性給藥治療脊髓損傷。

本發(fā)明克服了現(xiàn)有的技術缺陷，制備了一種高表達OTULIN蛋白的M2型骨髓巨噬細胞外泌體即hiOTULIN-M2-Exos，可以發(fā)揮改善脊髓損傷后局部缺血缺氧環(huán)境，促進血管再生的作用，更加利于神經(jīng)再生以及局部組織的存活。通過與光固化水凝膠結合形成外泌體緩釋系統(tǒng)應用于脊髓損傷局部，提高了外泌體治療效率，避免了被肝腎代謝，并可持續(xù)緩釋實現(xiàn)長時間作用，顯著改善了小鼠脊髓損傷后的功能恢復。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在克服現(xiàn)有技術缺陷，提供一種M2型骨髓巨噬細胞外泌體及其在制備脊髓損傷治療制劑中的應用，以及制備得到的脊髓損傷治療制劑。該外泌體可顯著促進損傷脊髓中的血管再生，改善運動功能恢復。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用了以下技術方案：

一種M2型骨髓巨噬細胞外泌體，是由M2型骨髓巨噬細胞分泌得到的。

所述的外泌體含有特異性標志物，包括CD63、CD9和TSG101，并且首次發(fā)現(xiàn)該外泌體高表達OTULIN蛋白。該蛋白在外泌體中的富集程度為M2型骨髓巨噬細胞中的7.22±0.06倍。

所述的M2型骨髓巨噬細胞外泌體即hiOTULIN-M2-Exos，是通過分離并培養(yǎng)原代骨髓巨噬細胞，誘導為M2型巨噬細胞；然后用含有無外泌體血清的完全培養(yǎng)基孵育，利用差速離心法收集得到。