[發明專利]M2型骨髓巨噬細胞外泌體及其應用、脊髓損傷治療制劑

有效

• 申請號: 202110370810.6
• 申請日: 2021-04-07
• 公開（公告）號: CN113046316B
• 公開（公告）日: 2022-11-22
• 發明（設計）人: 羅子翔;彭偉;曹勇;胡建中;段春岳;吳天定;許琰;謝勇;劉煜東
• 申請（專利權）人: 中南大學湘雅醫院
• 主分類號: C12N5/0786
• 分類號: C12N5/0786;A61K35/15;A61L26/00;A61P17/02;A61P25/00
• 代理公司: 長沙市融智專利事務所(普通合伙) 43114
• 代理人: 袁靖

1.一種高表達OTULIN的M2型骨髓巨噬細胞外泌體，其特征在于，所述的外泌體含有一般標志物CD63、CD9、TSG101以及特異性標志物OTULIN；所述的外泌體能直接被脊髓血管內皮細胞攝取；其獲得過程為：分離并培養4-6周C57BL/6小鼠股骨和脛骨骨髓巨噬細胞，使用含有10ng/ml IL-4、10％FBS和1％青鏈霉素的IMDM完全培養基誘導72小時為M2型巨噬細胞，收集無外泌體血清完全培養基孵育24-72小時后的M2型骨髓巨噬細胞上清液，所述的無外泌體血清完全培養基為DMEM基礎培養基中添加10%無外泌體血清和1%青鏈霉素；800×g離心10分鐘，3000×g離心30分鐘；4℃下10000×g離心1h后，用0.22μm過濾器過濾上清液，去除細胞和碎片，收集外泌體；將外泌體在140,000×g離心3h后，在PBS中重懸，再在140,000×g離心3h，獲得高純度外泌體。

2.權利要求1所述的高表達OTULIN的M2型骨髓巨噬細胞外泌體在制備脊髓損傷治療制劑中的應用。

3.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，所述的高表達OTULIN的M2型骨髓巨噬細胞外泌體能制備成局部外用制劑。

4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，所述的局部外用制劑包括以光固化水凝膠為載體的外泌體-光固化水凝膠緩釋制劑。

5.根據權利要求4所述的應用，其特征在于，所述的外泌體-光固化水凝膠緩釋制劑構建：將M2型骨髓巨噬細胞外泌體與水相光固化水凝膠混合，水凝膠中外泌體的濃度為100-200ug/mL，避光條件下進行共孵育1-2h，形成水相外泌體-水凝膠緩釋制劑，于-20℃避光保存。

6.根據權利要求4所述的應用，其特征在于，外泌體-水凝膠緩釋制劑使用時，在避光條件下將外泌體-水凝膠緩釋制劑加熱到37-40℃，使其恢復水相；在損傷脊髓表面以敷料形式按照80-120ul/cm²覆蓋外泌體-凝膠緩釋制劑，于365-405nm 60mW/cm²條件下光照30s-1min，使水凝膠從水相轉變為固相，縫合傷口。

7.一種脊髓損傷后促進血管再生的治療制劑，其特征在于，包含權利要求1所述的高表達OTULIN的M2型骨髓巨噬細胞外泌體。