[發明專利]一種改良L-15培養基及其在培養對蝦肌肉細胞中的應用

有效

• 申請號: 202110370342.2
• 申請日: 2021-04-07
• 公開（公告）號: CN113025557B
• 公開（公告）日: 2021-12-14
• 發明（設計）人: 葉超霞;鄒丹陽
• 申請（專利權）人: 華南師范大學
• 主分類號: C12N5/07
• 分類號: C12N5/07
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 郭煒綿

1.改良L-15培養基在培養南美白對蝦肌肉細胞中的應用，其特征在于：

所述改良L-15培養基與L-15培養基的區別僅在于：

丙氨酸為10mmol/L、甘氨酸為3mmol/L、絲氨酸為3mmol/L、組氨酸為1.5mmol/L、賴氨酸為0.5mmol/L、精氨酸為1.5mmol/L、纈氨酸為1.5mmol/L、蘇氨酸為1mmol/L、蛋氨酸為0.5mmol/L、亮氨酸為0.5mmol/L、天冬氨酸為5mmol/L、谷氨酰胺為0.5mmol/L、苯丙氨酸為1mmol/L，添加2.5mmol/L?；撬?、50mmol/L脯氨酸、20mmol/L谷氨酸、10%胎牛血清、100 IU/mL青霉素和0.1mg/mL鏈霉素，pH值為7.2-7.4。

2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于包括以下步驟：取所述的改良L-15培養基，加入改良L-15培養基10%體積的對蝦肌肉細胞提取液，在27℃恒溫、5%CO₂中培養，每隔3d更換改良L-15培養基；

所述的對蝦肌肉細胞提取液，由以下步驟制得：

（1）將對蝦滅菌，然后剪取肌肉，放入添加5%雙抗的PBS溶液中潤洗，接著放入乙醇溶液中潤洗，再放入添加5%雙抗的PBS溶液中潤洗，最后放入添加5%雙抗的培養基1中浸泡至少30min；

（2）將對蝦肌肉取出剪碎成乳糜狀，加入添加10%胎牛血清和1%雙抗的培養基2，將對蝦肌肉吹散均勻后過篩，再加入添加5%雙抗的培養基1重懸并離心，最后用添加10%胎牛血清和1%雙抗的培養基2稀釋，得到對蝦肌肉細胞提取液；

步驟（1）和（2）所述的培養基1和培養基2，為L-15或M199培養基。

3.根據權利要求2所述的應用，其特征在于：所述的更換改良L-15培養基，是將培養體系離心，取沉淀物，棄去改良L-15培養基，加入新的改良L-15培養基。

4.根據權利要求2所述的應用，其特征在于：

步驟（1）所述的滅菌，是在0.02g/L的高錳酸鉀溶液中浸泡至少5min；

步驟（1）所述的乙醇溶液為75%乙醇溶液。

5.根據權利要求2所述的應用，其特征在于：步驟（2）所述的過篩是過100μm的細胞篩。

6.根據權利要求2所述的應用，其特征在于：步驟（1）和（2）所述的雙抗為青霉素和鏈霉素。