[發明專利]一種CIK細胞庫的構建方法

在審

• 申請號: 202110367830.8
• 申請日: 2021-04-06
• 公開（公告）號: CN113445132A
• 公開（公告）日: 2021-09-28
• 發明（設計）人: 王曉宇;李崴;郭康合;林冠妃;李秋宛
• 申請（專利權）人: 海南優尼科爾生物科技有限公司
• 主分類號: C40B50/06
• 分類號: C40B50/06;C12N5/0783;A01N1/02
• 代理公司: 北京盛凡智榮知識產權代理有限公司 11616
• 代理人: 葉似錦

本發明公開了CIK細胞庫的構建方法，步驟依次包括：采集人外周血，分離自體血漿，分離外周血單個核細胞，擴增培養CIK細胞，CIK細胞檢測，CIK細胞凍存，編碼入庫并上傳細胞信息檔案。本發明屬于細胞庫構建技術領域，具體是指一種基于CIK細胞庫的構建方法。

技術領域

本發明屬于細胞庫構建技術領域，具體是指一種基于CIK細胞庫的構建方法。

背景技術

19世紀80年代興起的細胞過繼免疫治療帶給了腫瘤患者新的希望。細胞因子誘導的殺傷細胞(cytokine-induced killer,CIK)是一群由多種細胞因子(IFN-γ、IL-2、IL-1等)、抗CD3抗體聯合誘導的以CD3+和CD56+T細胞為主的異質細胞，通過細胞毒T細胞(cytotoxiclymphocyte，CTL)溶胞效應和細胞凋亡途徑發揮抗腫瘤作用，并能消除術后微小殘留病灶，防止癌細胞擴散與腫瘤復發，是一種新型的過繼免疫療法中的主要功能細胞。生理狀態下，表達CD3+和CD56+T淋巴細胞在正常人體外周血中占(1-5)％，遠不能滿足臨床治療的需要。隨著體外擴增技術的日趨完善，為臨床提供足量的CD3+和CD56+效應T 細胞成為現實。然而，隨著年齡的增長人體內的CIK細胞活性會逐漸下降，待有需要時難以滿足使用需求，趁著年輕將細胞儲存下來成為一種新的選擇。為了便于人們有效儲存和使用有效的組織和細胞資源，目前在世界范圍內已經有多種細胞庫或者組織庫建立，如臍血造血干細胞庫，間充質干細胞庫等。所謂的細胞庫是指大規模生產制備與長期在約為-196℃液氮中貯存可溯源的細胞及搜集相關資料的場所。

發明內容

為了解決上述難題，本發明提供了一種基于CIK細胞庫的構建方法。

為了實現上述功能，本發明采取的技術方案如下：一種基于CIK細胞庫的構建方法，包括如下步驟：

1)采集人外周血；

2)分離自體血漿；

3)分離外周血單個核細胞；

4)擴增培養CIK細胞；

5)CIK細胞檢測；

6)CIK細胞凍存；

7)編碼入庫并上傳細胞信息檔案。

作為優選，用于提供所述人外周血的供者為在人外周血采集前符合獻血標準的供者。

作為優選，所述步驟1)中的采集人外周血是將人外周血采集至含枸櫞酸鈉抗凝劑的采血袋中。

進一步地，所述步驟2)中的分離自體血漿的方法，包括如下步驟：

1)將采血袋中含枸櫞酸鈉抗凝劑的人外周血轉移至50ml離心管，利用離心機進行離心；

2)離心條件：4℃，1000-2800rpm離心5-20min，離心機調節升速1- 9，降速1-9；

3)取上層淡黃色液體至新的50ml離心管，置于56℃水浴鍋中滅活30 min后，3000-3500rpm離心3-8min收集上清得到自體血漿，置于-20℃凍存備用。

進一步地，所述步驟3)中的分離外周血單個核細胞的方法，包括如下步驟：

1)將去除自體血漿后的下層紅色液體按照體積量計用生理鹽水對倍稀釋吹打混勻；

2)加入其0-2倍體積的0wt％-6wt％的羥乙基淀粉溶液，混勻后靜置0-40min，緩慢地將20-25ml紅色液體和/或上清液加入到含20ml 淋巴細胞分離液的離心管中，使其與淋巴細胞分離液形成一個明顯的分層；

3)利用離心機進行離心分離，離心條件：4℃，1800-5000rpm離心10- 30min，離心機調節升速1-3，降速1-3；