[發(fā)明專利]一種富集多不飽和脂肪酸的脂肪酶固定化方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202110367775.2
• 申請日: 2021-04-06
• 公開（公告）號: CN113073090A
• 公開（公告）日: 2021-07-06
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王小三;楊壯壯;江聰;程昕祎;董喆;黃健花;常明
• 申請（專利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類號: C12N9/20
• 分類號: C12N9/20;C12N11/082;C12P7/64
• 代理公司: 無錫承果知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 32373
• 代理人: 張婷婷

本發(fā)明公開了一種富集多不飽和脂肪酸的脂肪酶固定化方法。本發(fā)明方法包括，將脂肪酶溶于緩沖液中得到脂肪酶液；取所述脂肪酶液與樹脂于反應(yīng)器中，反應(yīng)后分離固液相，將固相干燥后即得到固定化脂肪酶。本發(fā)明采用大孔樹脂固定游離的脂肪酶，脂肪酶固定化之后提高酶本身的在富集n?3PUFA方面的活力，增強水解或醇解的效率，提升產(chǎn)物中n?3PUFA含量，同時產(chǎn)物和酶易于分離，且可以回收利用，節(jié)約成本。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及油脂深加工領(lǐng)域，具體涉及一種富集多不飽和脂肪酸的脂肪酶固定化方法。

背景技術(shù)

脂肪酶是油脂工業(yè)中常用的生物催化劑，常用于催化油脂的水解和特殊脂質(zhì)的合成。其來源廣泛，常見于原核生物和真核生物中。近幾年研究地較多的脂肪酶主要來源于細(xì)菌和酵母中，而與動植物脂肪酶相比，微生物脂肪酶具有諸多優(yōu)點，如容易獲得，產(chǎn)酶周期短，能夠大規(guī)模生產(chǎn)，具有更廣的pH適應(yīng)性、溫度耐受性等。

在油脂工業(yè)中，直接使用游離酶，反應(yīng)后很難將脂肪酶分離出來再次利用，會直接影響后續(xù)的工序操作，也會造成脂肪酶的浪費，造成較高的成本。酶的固定化，將游離的脂肪酶固定在載體上。一方面易于酶促反應(yīng)結(jié)束后油和酶的分離，分離后的固定化脂肪酶可重復(fù)使用。另一方面固定化酶比游離酶具有更高的酶活力和穩(wěn)定性。

多不飽和脂肪酸(PUFA)具有抗炎、治療冠心病和提升智力等多種生理功能。市面上的n-3 PUFAs產(chǎn)品主要有乙酯型、甘油酯型和游離脂肪酸型三種形式。但乙酯型在人體中消化和吸收較為困難，游離脂肪酸型穩(wěn)定性差，甘油酯型是最佳的選擇，而甘油酯型中n-3PUFAs的含量相對較低，在30％左右，不能滿足人們的保健及藥用需求，濃縮甘油酯型n-3PUFAs非常有必要。

因此，開發(fā)一種綠色高效，且可以縮減成本的酶法富集n-3 PUFAs的方法具有重要研究意義和價值。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，提供了一種富集多不飽和脂肪酸的脂肪酶固定化方法，具體是利用脂肪酶液體和樹脂混合固化反應(yīng)，使脂肪酶固定化。通過本發(fā)明的方法，能夠?qū)⒅久傅闹貜?fù)使用次數(shù)提高到5次以上，且相比較游離酶具有更高的催化效率。對于酶法富集油脂中n-3多不飽和脂肪酸甘油酯的工業(yè)化提供了重要技術(shù)支撐。

作為本發(fā)明的一個方面，提供了一種富集多不飽和脂肪酸的脂肪酶固定化方法，所述方法包括，將脂肪酶溶于緩沖液中得到脂肪酶液；取所述脂肪酶液與樹脂于反應(yīng)器中，反應(yīng)后分離固液相，將固相干燥后即得到固定化脂肪酶；

其中，所述脂肪酶包括來源于圓筒狀假絲酵母Candida cylindracea的AYAmano400SD、AYAmano30SD和來源于南極假絲酵母Candida antarctica的Candida antarcticalipase A中的一種或多種。

進一步地，所述樹脂為苯乙烯系大孔吸附樹脂，包括NKA-9、AB-8和D101中的一種或多種。

進一步地，所述緩沖液包括磷酸鹽緩沖液、硼酸鹽緩沖液、檸檬酸鹽緩沖液中的一種或者多種。

進一步地，所述脂肪酶液的pH為5～7；脂肪酶液中脂肪酶濃度為5～30mg/mL。

進一步地，所述脂肪酶液和樹脂的質(zhì)量比為2:1～150:1。

進一步地，所述反應(yīng)的溫度為20～50℃。

進一步地，所述反應(yīng)的時間為3～12h。

進一步地，所述反應(yīng)器包括恒溫攪拌器或恒溫振蕩器；其中，攪拌或震蕩速率為60～300r/min。

作為本發(fā)明的第二個方面，提供一種固定化脂肪酶，由上述任一富集多不飽和脂肪酸的脂肪酶固定化方法制得的。