[發(fā)明專利]檢測(cè)甲狀腺球蛋白的免疫膠體金試紙條及其制備方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110367758.9
• 申請(qǐng)日: 2017-04-28
• 公開（公告）號(hào): CN113092751A
• 公開（公告）日: 2021-07-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 何向輝;王義增
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院
• 主分類號(hào): G01N33/558
• 分類號(hào): G01N33/558;G01N33/544
• 代理公司: 北京方圓嘉禾知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11385
• 代理人: 李正

1.檢測(cè)甲狀腺球蛋白的免疫膠體金試紙條在制備術(shù)中現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)可疑淋巴結(jié)的甲狀腺球蛋白值的工具中的應(yīng)用，其特征在于，所述檢測(cè)甲狀腺球蛋白的免疫膠體金試紙條，包括依次部分疊接在PVC底板上的樣品墊、金標(biāo)墊、硝酸纖維素膜、吸水墊，其特征在于：所述金標(biāo)墊包被有膠體金標(biāo)記的一種抗甲狀腺球蛋白抗體，所述硝酸纖維素膜上設(shè)有分隔的檢測(cè)線和質(zhì)控線，檢測(cè)線包被另一種抗甲狀腺球蛋白抗體，質(zhì)控線上包被羊抗鼠IgG。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述應(yīng)用，其特征在于，所述檢測(cè)甲狀腺球蛋白的免疫膠體金試紙條的制備方法，包括以下步驟：

Ⅰ.膠體金的制備：向沸騰的超純水中加入1％氯金酸溶液，再加入1％檸檬酸三鈉溶液，加熱至溶液呈酒紅色透亮，冷卻，定容，即為膠體金溶液；

Ⅱ.膠體金標(biāo)記甲狀腺球蛋白抗體的制備及純化：取步驟Ⅰ中制得的膠體金溶液，以0.1M K₂CO₃溶液調(diào)節(jié)pH值至8.5-9，加入抗甲狀腺球蛋白抗體，靜置后加入2％BSA溶液，靜置，制得金標(biāo)抗體溶液；

所述金標(biāo)抗體溶液在3-5℃、1000-1500rpm、10-20min條件下離心，去沉淀；再在3-5℃、10000-12000rpm、30-40min的條件下離心，去上清；以pH910mM Tris液復(fù)溶，加入0.5％PEG20000；5-10min后在3-5℃、10000-12000rpm、30-40min條件下再次離心，去上清；以膠體金復(fù)溶液復(fù)溶；

Ⅲ.金標(biāo)墊與樣品墊預(yù)處理：金標(biāo)墊以金標(biāo)墊處理液浸泡，室溫干燥；樣品墊以樣品墊處理液浸泡，室溫干燥；

Ⅳ.試紙條的組裝：

將包被有另一種抗甲狀腺球蛋白抗體和羊抗鼠IgG的硝酸纖維素膜和吸水墊次第粘貼在PVC底板上，二者部分重合，吸水墊在上；

將步驟Ⅱ中制得的金標(biāo)抗體溶液涂布于步驟Ⅲ中預(yù)處理過的金標(biāo)墊，室溫干燥；將金標(biāo)墊粘貼在PVC底板上，與硝酸纖維素膜的未重疊側(cè)部分重疊，金標(biāo)墊在上；

將步驟Ⅲ中預(yù)處理過的樣品墊粘貼在PVC底板上，與金標(biāo)墊的未重疊側(cè)部分重疊，樣品墊在上。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述應(yīng)用，其特征在于：所述膠體金復(fù)溶液及金標(biāo)墊預(yù)處理液為5％蔗糖、1％BSA、0.1％Tween20、0.01％NaN₃的PBS液，pH8.5；所述樣品墊預(yù)處理液為0.1％Tween20、pH 8.5Tris-HCl液；所述T線劃線稀釋液、C線劃線稀釋液為0.01M pH 7.2PBS液。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述應(yīng)用，其特征在于：所述硝酸纖維素膜上抗甲狀腺球蛋白抗體濃度均為2-3mg/ml，羊抗鼠IgG抗體濃度均為3-5mg/ml。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述應(yīng)用，其特征在于：將步驟Ⅳ制得的試紙板切成寬約3-4mm的試紙條。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述應(yīng)用，其特征在于：步驟Ⅱ中抗甲狀腺球蛋白抗體加入量為5μg。

7.根據(jù)權(quán)利要求2所述應(yīng)用，其特征在于：步驟Ⅱ中0.1M K₂CO₃溶液調(diào)節(jié)pH值至9。

8.檢測(cè)甲狀腺球蛋白的免疫膠體金試紙條在制備輔助診斷甲狀腺乳頭狀癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的工具中的應(yīng)用，其特征在于，所述檢測(cè)甲狀腺球蛋白的免疫膠體金試紙條，包括依次部分疊接在PVC底板上的樣品墊、金標(biāo)墊、硝酸纖維素膜、吸水墊，其特征在于：所述金標(biāo)墊包被有膠體金標(biāo)記的一種抗甲狀腺球蛋白抗體，所述硝酸纖維素膜上設(shè)有分隔的檢測(cè)線和質(zhì)控線，檢測(cè)線包被另一種抗甲狀腺球蛋白抗體，質(zhì)控線上包被羊抗鼠IgG。