[發明專利]一種橡膠草葉綠體提取方法

在審

• 申請號: 202110367518.9
• 申請日: 2021-04-06
• 公開（公告）號: CN113061567A
• 公開（公告）日: 2021-07-02
• 發明（設計）人: 謝全亮;王旭初;李鴻彬
• 申請（專利權）人: 石河子大學
• 主分類號: C12N5/04
• 分類號: C12N5/04
• 代理公司: 成都中弘信知識產權代理有限公司 51309
• 代理人: 張芳

1.一種橡膠草葉綠體提取方法，其特征在于，包括以下步驟：

A采集橡膠草植物的完整葉片；

B將所述葉片組織破碎后進行初提得到橡膠草葉綠體粗提液；

C在細胞分離液的上層加入所述橡膠草葉綠體粗提液后在4℃，進行第一次超高速離心10-15min；

D離心結束后在吸取所述細胞分離液的的沉淀，用葉綠體提取液清洗沉淀后進行第二次超高速離心12min，沉淀即可得完整橡膠草葉綠體。

2.根據權利要求1所述一種橡膠草葉綠體提取方法，其特征在于，所述初提的方法包括在所述葉片組織中按照重量比為100：1加入PVPP粉末充分研磨，在所述葉片組織的研磨樣品中按照每克樣品加入5mL葉綠體提取液，過濾研磨液加入葉綠體提取液。

3.根據權利要求1所述一種橡膠草葉綠體提取方法，其特征在于，所述葉綠體提取液的配置方法包括將0.3mM/L山梨醇，5mM/L乙二胺四乙酸EDTA，1mM/LMgCL₂，10mM/LNaHCO₃，0.5mM/L二硫蘇糖醇DTT，按照體積比1:1:1:1:2的體積比混合后，用ddH₂O定容到850mL完全溶解；接著加入100mL緩沖液溶液，調節酸堿度pH為7.5，全混勻后用ddH₂O定容至1L得到所述葉綠體提取液。

4.根據權利要求1所述一種橡膠草葉綠體提取方法，其特征在于，所述細胞分離液按照由下至上依次鋪70％濃度的細胞分離液1mL、50％濃度的細胞分離液2mL、30％濃度的細胞分離液3mL、10％濃度的細胞分離液4mL，最上面層加入1mL所述葉綠體粗提液。

5.根據權利要求1所述一種橡膠草葉綠體提取方法，其特征在于，所述超速離心為轉速為8000RCF。