[發明專利]一種DNA及其甲基化水平的檢測試劑盒和制備方法、應用

有效

• 申請號: 202110366210.2
• 申請日: 2021-04-06
• 公開（公告）號: CN113151403B
• 公開（公告）日: 2023-06-16
• 發明（設計）人: 鄒綱;楊珂昕
• 申請（專利權）人: 中國科學技術大學
• 主分類號: C12Q1/6825
• 分類號: C12Q1/6825;C12Q1/6827
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 潘穎

1.一種DNA的檢測試劑盒，其特征在于，包括ssDNA1修飾的殼聚糖纖維、ssDNA2修飾的金納米粒子；所述ssDNA1為與目的DNA一端序列互補的ssDNA；所述ssDNA2為與目的DNA另一端序列互補的ssDNA；所述殼聚糖纖維為帶有熒光標記的殼聚糖纖維。

2.根據權利要求1的所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述熒光標記為FITC。

3.根據權利要求1的所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述目的DNA為p16。

4.權利要求1至3中任一項所述檢測試劑盒的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

將殼聚糖、熒光素溶于溶劑中，得到殼聚糖溶液，濃縮，制成纖維；除去纖維表面的溶劑，干燥，表面修飾環氧基團，得到環氧修飾的殼聚糖纖維；氨基修飾的ssDNA1與環氧修飾的殼聚糖纖維發生反應，得到ssDNA1修飾的殼聚糖纖維；

將金納米粒子與巰基修飾的ssDNA2進行孵育，得到ssDNA2修飾的金納米粒子。

5.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，以g/mg/mL計，所述殼聚糖溶液中殼聚糖、熒光素與溶劑的比例為（0.5~5）：（1~10）：（10~50）。

6.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述表面修飾環氧基團的方法為：乙二醇二縮水甘油醚與殼聚糖纖維在25~30℃條件下反應10~20h；

氨基修飾的ssDNA1與環氧修飾的殼聚糖纖維發生反應的溫度為15~35℃，時間為3~6h。

7.一種非診斷目的檢測DNA的方法，其特征在于，采用權利要求1至3中任一項所述檢測試劑盒進行檢測，具體為：

將ssDNA1修飾的殼聚糖纖維與經解鏈處理的待檢測樣品進行雜交反應，得到第一雜交產物；

將ssDNA2修飾的金納米粒子與第一雜交產物進行雜交反應，得到第二雜交產物；

檢測第二雜交產物的光波導熒光亮度，若熒光發生淬滅，則待檢測樣品中含有目的DNA，目的DNA的濃度根據標準曲線獲得；若熒光未發生淬滅，則待檢測樣品中不含有目的DNA。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述雜交反應的溫度為36~38℃，時間為1~3h。

9.一種p16?DNA甲基化水平的檢測試劑盒，其特征在于，包括ssDNA1修飾的殼聚糖纖維、ssDNA2修飾的金納米粒子、p16DNA甲基化標準試劑和HpaII酶；所述ssDNA1為與p16?DNA一端序列互補的ssDNA；所述ssDNA2為與目的DNA另一端序列互補的ssDNA；所述殼聚糖纖維為帶有熒光標記的殼聚糖纖維；

所述ssDNA1序列為5'-GCCGGACGCCTG-3';

所述ssDNA2序列為:5'-GAACGCAACTCC-3'。

10.一種非診斷目的檢測p16?DNA甲基化水平的方法，其特征在于，采用權利要求9所述檢測試劑盒進行檢測，具體為：

將ssDNA1修飾的殼聚糖纖維與經解鏈處理的待檢測樣品進行雜交反應，得到第一雜交產物；

將ssDNA2修飾的金納米粒子與第一雜交產物進行雜交反應，得到第二雜交產物后經HpaII酶切；

檢測第二雜交產物的光波導熒光亮度，根據標準曲線獲得p16DNA甲基化水平；

所述ssDNA1序列為5'-GCCGGACGCCTG-3';

所述ssDNA2序列為:5'-GAACGCAACTCC-3'。