[發(fā)明專利]原核Argonaute蛋白的基因編輯應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110365085.3
• 申請日: 2021-04-01
• 公開（公告）號: CN112941107A
• 公開（公告）日: 2021-06-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張智英;邢佳妮;麻麗霞;閆強(qiáng);李鵬程;徐坤;程心珍;閆娜娜;孫永森;李倩
• 申請（專利權(quán)）人: 西北農(nóng)林科技大學(xué)
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N15/55;C12N15/113
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責(zé)任公司 61200
• 代理人: 范巍

1.一種基于pAgo的基因編輯系統(tǒng)，其特征在于：該基因編輯系統(tǒng)包括核酸酶表達(dá)載體，所述核酸酶表達(dá)載體包括通過啟動子的調(diào)控實(shí)現(xiàn)表達(dá)的原核Argonaute蛋白基因序列，所述核酸酶表達(dá)載體表達(dá)的原核Argonaute蛋白具有被轉(zhuǎn)錄本激活并靶向該轉(zhuǎn)錄本對應(yīng)DNA序列的核酸酶活性。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種基于pAgo的基因編輯系統(tǒng)，其特征在于：所述原核Argonaute蛋白基因序列選自NgAgo蛋白基因序列、TtAgo蛋白基因序列或選自根據(jù)目標(biāo)宿主細(xì)胞的密碼子偏好優(yōu)化后的NgAgo、TtAgo蛋白基因序列。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種基于pAgo的基因編輯系統(tǒng)，其特征在于：所述基因編輯系統(tǒng)還包括RNA導(dǎo)引激活序列表達(dá)載體，RNA導(dǎo)引激活序列表達(dá)載體包括通過啟動子的調(diào)控實(shí)現(xiàn)作為所述轉(zhuǎn)錄本的RNA導(dǎo)引激活序列的表達(dá)的模板。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述一種基于pAgo的基因編輯系統(tǒng)，其特征在于：所述RNA導(dǎo)引激活序列選自目標(biāo)宿主細(xì)胞基因組靶序列的同源序列。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述一種基于pAgo的基因編輯系統(tǒng)，其特征在于：所述RNA導(dǎo)引激活序列的長度大于10nt。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述一種基于pAgo的基因編輯系統(tǒng)，其特征在于：所述核酸酶表達(dá)載體中，啟動子選自T7啟動子、阿拉伯糖啟動子或CMV啟動子；所述RNA導(dǎo)引激活序列表達(dá)載體中，啟動子選自U6類啟動子。

7.根據(jù)權(quán)利要求3所述一種基于pAgo的基因編輯系統(tǒng)，其特征在于：所述基因編輯系統(tǒng)還包括與RNA導(dǎo)引激活序列互補(bǔ)配對的單鏈DNA片段。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述一種基于pAgo的基因編輯系統(tǒng)，其特征在于：所述基因編輯系統(tǒng)中，核酸酶表達(dá)載體含量按物質(zhì)的量計為單鏈DNA片段含量的3倍以內(nèi)。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種基于pAgo的基因編輯系統(tǒng)，其特征在于：所述基因編輯系統(tǒng)還包括報告載體和/或用于進(jìn)行同源重組修復(fù)的供體載體，所述報告載體包括報告基因表達(dá)盒，所述報告基因表達(dá)盒包括報告基因序列以及位于該序列上游的與目標(biāo)宿主細(xì)胞基因組靶序列同源的序列。

10.根據(jù)權(quán)利要求2、4或9所述一種基于pAgo的基因編輯系統(tǒng)，其特征在于：所述目標(biāo)宿主細(xì)胞選自真核細(xì)胞。