[發明專利]一種ES2肽的無抗凝活性肝素化修飾并聯合紫杉醇的結合物及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202110362873.7
• 申請日: 2021-04-02
• 公開（公告）號: CN113061180A
• 公開（公告）日: 2021-07-02
• 發明（設計）人: 譚海寧;孫鳳;侯慧文;王潔;唐雯;李妍;符家愛;盧魯
• 申請（專利權）人: 山東大學
• 主分類號: C07K14/78
• 分類號: C07K14/78;C07K1/107;A61K38/39;A61K47/61;A61K31/337;A61P27/02;A61P9/10;A61P19/02;A61P35/00
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 宋海海

本發明提供一種ES2肽的無抗凝活性肝素化修飾并聯合紫杉醇的結合物及其制備方法和應用，屬于生物醫藥技術領域。本發明通過控制相關工藝條件，可以制備得到不同結合度的PTX?無抗凝活性肝素～CYS?ES2肽結合物。制備得到的ES2肽的無抗凝活性肝素化修飾并聯合紫杉醇的結合物與ES2肽相比，保留了ES2肽抗新生血管生成與抗腫瘤活性，整合了肝素和紫杉醇的抗腫瘤等，使其具有更高的穩定性、親水性、靶向性等特性，因此具有更好的使用效果和應用價值。

技術領域

本發明屬于生物醫藥技術領域，具體涉及一種ES2肽的無抗凝活性肝素化修飾并聯合紫杉醇的結合物及其制備方法和應用。

背景技術

公開該背景技術部分的信息僅僅旨在增加對本發明的總體背景的理解，而不必然被視為承認或以任何形式暗示該信息構成已經成為本領域一般技術人員所公知的現有技術。

內皮抑素(Endostatin,ES)是目前最有效的內源性新生血管生成抑制劑之一，能夠有效的抑制機體內的病理性的新生血管的生成過程，具有廣譜的抗腫瘤能力，且沒有明顯的毒性作用。國內外研究學者經過多年努力，發現ES具有自身獨特的抗血管生成和抗腫瘤活性。

2005年9月，國家食品藥品監督管理局批準了國產新型重組人血管內皮抑素(Endostar，恩度)在國內上市，將其聯合化療藥物用于晚期非小細胞肺癌的治療。ES2(IVRRADRAAVP，SEQ ID NO.1)是ES中的一段由11個氨基酸組成的多肽序列，包含ES中的氨基酸60-70序列和三個表面暴露的精氨酸殘基Arg⁶²，Arg⁶³和Arg⁶⁶。ES2具有明顯的抗新生血管生成和抗腫瘤活性，更容易進入血管內部且更易獲得與改造。但ES2也存在體內半衰期較短和穩定性較差等缺點，其應用受到了很大的限制。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明提供一種ES2肽的無抗凝活性肝素化修飾并聯合紫杉醇的結合物及其制備方法和應用。本發明通過優化控制反應相關參數和條件，從而成功制備得到具有不同結合度的無抗凝活性肝素～胱胺-ES2肽結合物和/或紫杉醇-無抗凝活性肝素～胱胺-ES2肽結合物，其具有良好的穩定性和生物活性，因此具有良好的實際應用之價值。

為實現上述技術目的，本發明采用的技術方案如下：

本發明的第一個方面，提供一種ES2肽的無抗凝活性肝素化修飾物，其由胱胺中的氨基通過酰胺化反應與無抗凝活性肝素(GSHP)中的羧基相連后ES2肽的羧基再次通過酰胺化反應與胱胺中游離的氨基結合而成，結構式如下：

GSHP～CYS-(ES2)n；

式中，n＝1～10；ES2的分子量為1223Da，GSHP的分子量為3000～8000Da。

進一步的，所述ES2肽的無抗凝活性肝素化修飾物還可聯合紫杉醇，具體的，其由胱胺上的氨基通過酰胺鍵與乙二醇斷裂肝素(GSHP)上的羧基相連，紫杉醇的羥基通過酯鍵與GSHP中的羧基相連以及ES2肽的羧基通過酰胺鍵與胱胺上的游離氨基連接形成，結構式如下：

(PTX)n₁-GSHP～CYS-(ES2)n₂；

式中，n₁＝1～5，n₂＝1～10，ES2的分子量為1223Da，等電點為10.42，GSHP的分子量為1000Da～8000Da，抗凝活性不高于40％。

優選的，所述n₁＝2，n₂＝10，分子量為3000～8000Da，抗凝活性不高于20％。

本發明的第二個方面，提供上述ES2肽的無抗凝活性肝素化修飾并聯合紫杉醇的結合物的制備方法，包括：

(1)當所述ES2肽的無抗凝活性肝素化修飾物為GSHP～CYS-ES2時，其制備方法為：