[發明專利]一種ES2肽的無抗凝活性肝素化修飾并聯合紫杉醇的結合物及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202110362873.7
• 申請日: 2021-04-02
• 公開（公告）號: CN113061180A
• 公開（公告）日: 2021-07-02
• 發明（設計）人: 譚海寧;孫鳳;侯慧文;王潔;唐雯;李妍;符家愛;盧魯
• 申請（專利權）人: 山東大學
• 主分類號: C07K14/78
• 分類號: C07K14/78;C07K1/107;A61K38/39;A61K47/61;A61K31/337;A61P27/02;A61P9/10;A61P19/02;A61P35/00
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 宋海海

1.一種ES2肽的無抗凝活性肝素化修飾物，其特征在于，其由胱胺中的氨基通過酰胺化反應與無抗凝活性肝素中的羧基相連后ES2肽的羧基再次通過酰胺化反應與胱胺中游離的氨基結合而成，結構式如下：

GSHP～CYS-(ES2)n；

式中，n＝1～10；GSHP的分子量為3000～8000Da。

2.如權利要求1所述的ES2肽的無抗凝活性肝素化修飾物，其特征在于，所述ES2肽的無抗凝活性肝素化修飾物還修飾有紫杉醇即ES2肽的無抗凝活性肝素化修飾并聯合紫杉醇的結合物，具體的，其由胱胺上的氨基通過酰胺鍵與乙二醇斷裂肝素上的羧基相連，紫杉醇的羥基通過酯鍵與GSHP中的羧基相連以及ES2肽的羧基通過酰胺鍵與胱胺上的游離氨基連接形成，結構式如下：

(PTX)n₁-GSHP～CYS-(ES2)n₂；

式中，n₁＝1～5，n₂＝1～10，GSHP的分子量為1000Da～8000Da，抗凝活性不高于40％；

優選的，所述n₁＝2，n₂＝10，分子量為3000～8000Da，抗凝活性不高于20％。

3.權利要求1所述的ES2肽的無抗凝活性肝素化修飾物的制備方法，其特征在于，包括：

S1、制備GSHP～CYS結合物：將GSHP溶解于水中，加入EDCI和NHS作為催化劑活化GSHP中的羧基，活化完成后調節pH至弱堿性，然后緩慢加入CYS溶液進行反應，反應完成后，反應產物經純化即得GSHP～CYS結合物；

S2、制備GSHP～CYS-ES2結合物：將ES2溶解于水中，加入EDCI和NHS作為催化劑，活化后，緩慢加入上述GSHP～CYS溶液繼續反應，反應結束后，反應產物經純化后即得GSHP～CYS-ES2結合物。

4.如權利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述步驟S1中，調節pH至弱堿性具體為加入堿液調節pH至7.40左右；加入CYS溶液后反應時間控制為8～15h，優選為10h；反應產物純化步驟包括透析和干燥步驟；或，

所述步驟S2中，活化時間控制為10-60min，優選為45min；緩慢加入GSHP～CYS溶液繼續反應，反應時間控制為12～48h，優選為24h；反應產物純化步驟包括透析、干燥。

5.權利要求2所述的ES2肽的無抗凝活性肝素化修飾并聯合紫杉醇的結合物的制備方法，其特征在于，包括：

S1、制備GSHP～CYS結合物：將GSHP溶解于水中，加入EDCI和NHS作為催化劑活化GSHP中的羧基，活化完成后調節pH至弱堿性，然后緩慢加入CYS溶液進行反應，反應完成后，反應產物經純化即得GSHP～CYS結合物；

S2、制備GSHP～CYS-TBA結合物：將上述GSHP～CYS溶于雙蒸水中，加入Dowex離子交換樹脂，攪拌后過濾除去樹脂，使用TBA溶液調整GSHP～CYS溶液pH至中性或弱堿性，凍干即得到GSHP～CYS-TBA結合物；

S3、制備PTX-GSHP～CYS結合物：將上述GSHP～CYS-TBA溶于有機溶劑中，添加DCC和DMAP作為催化劑進行催化反應，然后緩慢加入PTX溶液，繼續反應，反應結束后，反應產物經純化后即得PTX-GSHP～CYS結合物；

S4、制備PTX-GSHP～CYS-ES2結合物：具體制備方法為：將ES2溶解于水中，加入EDCI和NHS作為催化劑，以活化羧基，活化后，緩慢加入上述PTX-GSHP～CYS溶液繼續反應，反應結束后，反應產物經純化后即得PTX-GSHP～CYS-ES2結合物。