[發明專利]一種固定化酶及其制備方法與在OPO制備中的應用

有效

• 申請號: 202110362057.6
• 申請日: 2021-04-02
• 公開（公告）號: CN113174384B
• 公開（公告）日: 2023-02-03
• 發明（設計）人: 黃雪;楊銳釗;馮光炷
• 申請（專利權）人: 仲愷農業工程學院
• 主分類號: C12N9/20
• 分類號: C12N9/20;C12N11/14;C12N11/02;C12P7/6458
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 顏希文

1.一種固定化酶的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

將磁性載體和脂肪酶分散在磷酸緩沖液中形成反應液，將反應液在20～60℃下反應1～6h，得到所述固定化酶；所述磁性載體為多巴胺修飾的鐵酸鋅；所述脂肪酶為米黑根毛霉脂肪酶；所述反應液中磁性載體的濃度為0.050～0.150g/mL；所述反應液中脂肪酶的濃度為0.2～1.5mg/mL。

2.如權利要求1所述固定化酶的制備方法，其特征在于，所述磷酸緩沖液的pH值為6～10。

3.如權利要求1所述固定化酶的制備方法，其特征在于，所述磁性載體的制備方法如下：

向Tris-HCl緩沖液中添加多巴胺和鐵酸鋅得到混合溶液，將混合溶液在25～50℃下反應12～24h，得到所述磁性載體。

4.如權利要求3所述固定化酶的制備方法，其特征在于，所述多巴胺和鐵酸鋅質量比為1∶0.5～5；所述Tris-HCl緩沖液的pH值為7～9；所述混合溶液中多巴胺的濃度為0.01～0.04g/mL。

5.如權利要求1所述固定化酶的制備方法，其特征在于，所述鐵酸鋅的制備方法如下：

將鐵鹽和鋅鹽加入乙二醇中，再加入聚乙二醇和乙酸鈉得到混合液，將混合液于100～220℃水熱反應12～24h，得到所述鐵酸鋅。

6.如權利要求5所述固定化酶的制備方法，其特征在于，所述鐵鹽為三氯化鐵或硝酸鐵；所述鋅鹽為氯化鋅或硝酸鋅；所述乙酸鈉、鐵鹽和鋅鹽的摩爾比為6～10∶2∶1；所述聚乙二醇的質量與乙二醇的體積配比為0.02～0.5g/mL。

7.采用權利要求1-6任一項所述固定化酶的制備方法制備的固定化酶。

8.如權利要求7所述的固定化酶的催化合成OPO方法，其特征在于，包括如下步驟：

將底物、固定化酶和正己烷混合均勻，在20-60℃下反應3-18h，得到所述OPO；所述底物為三棕櫚酸甘油酯和油酸的混合物。

9.如權利要求8所述固定化酶催化合成OPO的方法，其特征在于，所述三棕櫚酸甘油酯和油酸的摩爾比為1：2～10；所述底物和固定化酶的質量比為1：0.04～0.12。