[發(fā)明專利]一種肽鏈水解試劑及其制備方法和應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110360904.5
• 申請(qǐng)日: 2021-04-02
• 公開（公告）號(hào): CN113125594B
• 公開（公告）日: 2022-06-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 倪鋒;高新昌;衣大龍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 安徽國肽生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/06;G01N30/30;G01N30/32;G01N30/34;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 寧波奧圣專利代理有限公司 33226
• 代理人: 程曉明

1.一種肽鏈水解試劑，其特征在于，由以下物質(zhì)組成：鹽酸二氧六環(huán)溶液、重氧水和二價(jià)金屬氯化物溶液；其中，所述鹽酸二氧六環(huán)溶液、所述重氧水和所述二價(jià)金屬氯化物溶液的摩爾比為(2~4): (35~40): (0.005~0.012)，所述的肽鏈水解試劑中的肽鏈含有谷氨酰胺、谷氨酸、天冬酰胺和天冬氨酸4種氨基酸中的一種或多種。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種肽鏈水解試劑，其特征在于，所述鹽酸二氧六環(huán)溶液中的鹽酸的濃度為1.7~2.2mol/L。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種肽鏈水解試劑，其特征在于，所述二價(jià)金屬氯化物溶液中的二價(jià)金屬離子可選自Mg²⁺、Ca²⁺、Co²⁺、Ni²⁺、Zn²⁺、Cd²⁺、Cu²⁺、Pb²⁺、Ba²⁺、Sr²⁺、Fe²⁺或Sn²⁺。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種肽鏈水解試劑的制備方法，其特征在于，包括：

a)將鹽酸二氧六環(huán)溶液和重氧水混勻，所述鹽酸二氧六環(huán)溶液和所述重氧水的摩爾比為(2~4)：(35~40)，得到二氧六環(huán)鹽酸重氧水溶液；

b)在步驟a)中的所述二氧六環(huán)鹽酸重氧水溶液中加入二價(jià)金屬氯化物溶液，所述重氧水和所述二價(jià)金屬氯化物溶液的摩爾比為(35~40): (0.005~0.012)，得到肽鏈水解試劑。

5.權(quán)利要求1所述的肽鏈水解試劑在氨基酸檢測(cè)分析的應(yīng)用，其特征在于，具體方法為：

1)稱取多肽或蛋白質(zhì)樣品，加入所述肽鏈水解試劑，冷凍、抽真空、充入惰性氣體后進(jìn)行加熱水解；

2)充分水解后，旋蒸除去溶劑，再用水溶解并將溶液的pH調(diào)至6.5~7.5；

3)加入金屬螯合劑除去二價(jià)金屬氯化物中的二價(jià)金屬離子，離心，得到上清液；

4)對(duì)步驟3)的所述上清液進(jìn)行液相色譜-高分辨質(zhì)譜分析，得到所述上清液的總離子質(zhì)量色譜圖；

5)提取步驟4)的所述總離子質(zhì)量色譜圖中谷氨酰胺、谷氨酸、天冬酰胺和天冬氨酸水解產(chǎn)物的選擇離子質(zhì)量色譜圖，根據(jù)所述水解產(chǎn)物的同位素二級(jí)碎片離子不相等的特性建立關(guān)系式，由所述關(guān)系式得到多肽或蛋白質(zhì)樣品中谷氨酰胺和谷氨酸的比值、天冬酰胺和天冬氨酸的比值。

6)分別獲得多肽或蛋白質(zhì)樣品中谷氨酸和天冬氨酸的總含量，根據(jù)步驟5）得到的所述比值，即可分別計(jì)算出多肽或蛋白質(zhì)樣品中谷氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、天冬氨酸的實(shí)際含量。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的肽鏈水解試劑在氨基酸檢測(cè)分析的應(yīng)用，其特征在于，步驟1)的所述水解的溫度為110℃，所述水解的時(shí)間為8～24h。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的肽鏈水解試劑在氨基酸檢測(cè)分析的應(yīng)用，其特征在于，步驟3)的所述金屬螯合劑與所述二價(jià)金屬離子的質(zhì)量比為12~24:1。

8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的肽鏈水解試劑在氨基酸檢測(cè)分析的應(yīng)用，其特征在于，步驟5)為配制除谷氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、天冬氨酸外的各個(gè)待測(cè)氨基酸的不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，得到所述混合標(biāo)準(zhǔn)溶液總離子質(zhì)量色譜圖，提取所述混合標(biāo)準(zhǔn)溶液總離子質(zhì)量色譜圖中的所述各個(gè)待測(cè)氨基酸的選擇離子質(zhì)量色譜圖，得到所述各個(gè)待測(cè)氨基酸的不同濃度對(duì)應(yīng)的峰面積，分別建立所述各個(gè)待測(cè)氨基酸的峰面積與濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到所述待測(cè)氨基酸的峰面積與濃度的線性關(guān)系式；

測(cè)量多肽或蛋白質(zhì)樣品的總離子質(zhì)量色譜圖，根據(jù)多肽或蛋白質(zhì)樣品的總離子質(zhì)量色譜圖相對(duì)應(yīng)的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的總離子質(zhì)量色譜圖的色譜峰位置，獲得多肽或蛋白質(zhì)樣品中的待測(cè)氨基酸相對(duì)應(yīng)的峰面積，代入相應(yīng)的所述待測(cè)氨基酸的線性關(guān)系式，得到多肽或蛋白質(zhì)樣品中的待測(cè)氨基酸的實(shí)際含量。