[發(fā)明專利]一種降鈣素原的檢測(cè)試劑盒及其制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110360472.8
• 申請(qǐng)日: 2021-04-02
• 公開（公告）號(hào): CN113092790A
• 公開（公告）日: 2021-07-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李宗祥;羅繼全;洪航
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 三諾生物傳感股份有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/74
• 分類號(hào): G01N33/74;G01N33/543
• 代理公司: 北京集佳知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 劉猛

本發(fā)明涉及醫(yī)療診斷技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種降鈣素原的檢測(cè)試劑盒及其制備方法。本發(fā)明使用兩種粒徑不同微球以及兩株P(guān)CT單抗和一株P(guān)CT多抗，大粒徑微球用鏈酶親核素修飾，小粒徑微球不做處理。采用鏈霉親和素與生物素放大系統(tǒng)，將大粒徑微球與鏈酶親核素連接，多抗用生物素進(jìn)行標(biāo)記，形成大膠乳微球?鏈霉親和素?生物素?多抗放大系統(tǒng)，從而提高其低值端的靈敏度，同時(shí)用小粒徑微球標(biāo)記兩株單抗提高其線性，從而獲得一個(gè)高靈敏度與寬線性的PCT試劑盒。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及醫(yī)療診斷技術(shù)領(lǐng)域，具體的說是涉及一種降鈣素原的檢測(cè)試劑盒及其制備方法。

背景技術(shù)

降鈣素原(PCT)是一種與炎癥感染相關(guān)的蛋白，當(dāng)細(xì)菌、真菌、寄生蟲感染以及膿毒癥等多臟功能衰竭時(shí)降鈣素原在體內(nèi)中的水平會(huì)升高，自身免疫、過敏和病毒感染時(shí)PCT不會(huì)升高。PCT反映了全身炎癥反應(yīng)的活躍程度。在臨床上PCT是嚴(yán)重細(xì)菌性炎癥和真菌感染的特異性指標(biāo)，而且也是膿毒癥和炎癥活動(dòng)有關(guān)的多臟器官衰竭的可靠指標(biāo)，同時(shí)也可用于指導(dǎo)抗生素的使用。

目前檢測(cè)PCT的方法有化學(xué)發(fā)光法、免疫層析法、免疫比濁法等。化學(xué)發(fā)光與免疫熒光法其檢測(cè)靈敏度高，但試劑成本較高。而免疫比濁法試劑相對(duì)于化學(xué)發(fā)光與免疫層析其靈敏度較低，但試劑成本較低。目前市面上免疫比濁法降鈣素原試劑普遍存在低值端的靈敏度較低與線性范圍較窄的問題，因此這一問題急需被解決。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種降鈣素原檢測(cè)試劑盒及其制備方法，使得所述試劑盒能夠提高低值端的靈敏度，并同時(shí)保證線性范圍維持在較寬的范圍。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

一種降鈣素原的檢測(cè)試劑盒，包括R1試劑與R2試劑；R1試劑包括緩沖液、無機(jī)鹽、防腐劑、表面活性劑和糖類；R2試劑包括標(biāo)記PCT多抗的大粒徑微球、標(biāo)記PCT單抗1的小粒徑微球、標(biāo)記PCT單抗2的小粒徑微球、緩沖液、無機(jī)鹽、防腐劑、表面活性劑和糖類；其中，所述PCT多抗通過鏈酶親和素與生物素系統(tǒng)標(biāo)記大粒徑微球。

本發(fā)明一方面通過利用大粒徑微球、鏈酶親核素生物素系統(tǒng)，利用這種放大系統(tǒng)提高了PCT項(xiàng)目低值端的靈敏度，但是隨著低值端靈敏度的提高，PCT的線性會(huì)下降，因此本發(fā)明同時(shí)采用兩株不同的PCT單抗標(biāo)記小粒徑微球，提高其線性寬度，從而獲得一個(gè)高靈敏度與寬線性的試劑盒。

作為優(yōu)選，所述大粒徑微球粒徑在350～450nm，更優(yōu)選地在400nm±20nm；小粒徑微球粒徑在100～200nm之間，更優(yōu)選地在150nm±20nm。

作為優(yōu)選，所述緩沖液選自磷酸鹽緩沖液、檸檬酸緩沖液、甘氨酸緩沖液、PBS緩沖液、硼酸緩沖液和Tris-HC1緩沖液，緩沖液濃度為50-300mmol/L，pH值5-8。在本發(fā)明具體實(shí)施方式中，所述R1中的緩沖液為甘氨酸緩沖液，所述R2中的緩沖液為硼酸緩沖液。

作為優(yōu)選，所述無機(jī)鹽為氯化鈉、氯化鎂、氯化鈣、硝酸鎂中的一種或兩種以上，無機(jī)鹽濃度為20-500mmol/L。在本發(fā)明具體實(shí)施方式中，所述R1中無機(jī)鹽為氯化鈣，所述R2中的無機(jī)鹽為氯化鈉。

作為優(yōu)選，所述防腐劑為疊氮鈉、ProClin300、硫化汞、山梨酸鉀中的一種或兩種以上，防腐劑的濃度為0.1-0.5％。在本發(fā)明具體實(shí)施方式中，所述R1和R2中防腐劑均為ProClin300。

作為優(yōu)選，所述表面活性劑為吐溫20、吐溫80、SDS中的一種或者兩種以上，表面活性劑的濃度為0.1-0.5％。在本發(fā)明具體實(shí)施方式中，所述R1和R2中表面活性劑均為SDS。

作為優(yōu)選，所述糖類為蔗糖、海藻糖、乳糖、半乳糖中的一種或者兩種以上，糖類的濃度為5-20％。在本發(fā)明具體實(shí)施方式中，所述R1和R2中糖類均為蔗糖。

作為優(yōu)選，所述R2中還可以加入脫脂奶粉、酪蛋白或BSA作為保護(hù)劑，濃度為0.1％；