[發(fā)明專利]一種釀酒酵母表達(dá)長(zhǎng)效重組人絲聚蛋白及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110357115.6
• 申請(qǐng)日: 2021-04-01
• 公開（公告）號(hào): CN113045638B
• 公開（公告）日: 2022-04-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙俊;劉潔;劉家爐;凡玉芳;孔國(guó)慶;周煒;何志遠(yuǎn)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蕪湖英特菲爾生物制品產(chǎn)業(yè)研究院有限公司;安徽普若汀生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C07K14/47
• 分類號(hào): C07K14/47;C12N15/12;C12N15/81;C12N1/19;A61K8/64;A61Q19/00;C12R1/865
• 代理公司: 合肥市澤信專利代理事務(wù)所(普通合伙) 34144
• 代理人: 方榮肖

1.一種釀酒酵母表達(dá)的長(zhǎng)效重組人絲聚蛋白，其特征在于：所述長(zhǎng)效重組人絲聚蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.如權(quán)利要求1所述的釀酒酵母表達(dá)的長(zhǎng)效重組人絲聚蛋白，其特征在于，所述長(zhǎng)效重組人絲聚蛋白的核苷酸序列所對(duì)應(yīng)的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.如權(quán)利要求2所述的釀酒酵母表達(dá)的長(zhǎng)效重組人絲聚蛋白，其特征在于，所述長(zhǎng)效重組人絲聚蛋白的氨基酸序列包括絲聚蛋白的氨基酸序列及人血清白蛋白的氨基酸序列；所述絲聚蛋白的氨基酸序列包括絲聚蛋白核苷酸序列重復(fù)單元C端的一個(gè)單體結(jié)構(gòu)所對(duì)應(yīng)的氨基酸序列。

4.一種釀酒酵母信號(hào)肽重組質(zhì)粒，其特征在于，其采用如權(quán)利要求1-2中任意一項(xiàng)所述的釀酒酵母表達(dá)的長(zhǎng)效重組人絲聚蛋白的基因。

5.如權(quán)利要求4所述的釀酒酵母信號(hào)肽重組質(zhì)粒，其特征在于，所述釀酒酵母信號(hào)肽重組質(zhì)粒的構(gòu)建包括以下操作步驟：

根據(jù)釀酒酵母Mfα基因的序列設(shè)計(jì)合成引物，所述合成引物包括正向引物Mfα-F及反向引物Mfα-R；

通過(guò)RT-PCR擴(kuò)增酵母中信號(hào)肽Mfɑ基因，獲得RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物后，膠回收所述RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，獲得膠回收產(chǎn)物；

對(duì)所述膠回收產(chǎn)物及空質(zhì)粒pYES2/CT進(jìn)行雙酶切，再進(jìn)行膠回收，獲得分泌信號(hào)肽片段Mfα及載體片段pYES2/CT；

連接所述分泌信號(hào)肽片段Mfα及所述載體片段pYES2/CT。

6.如權(quán)利要求4所述的釀酒酵母信號(hào)肽重組質(zhì)粒，其特征在于，所述正向引物Mfα-F如Seq ID NO.3所示，所述反向引物Mfα-R如Seq ID NO.4所示。

7.一種釀酒酵母分泌表達(dá)載體，其特征在于，其含有如權(quán)利要求1-2中任意一項(xiàng)所述的釀酒酵母表達(dá)的長(zhǎng)效重組人絲聚蛋白的基因。

8.一種釀酒酵母營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株，其特征在于，所述釀酒酵母營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株含有如權(quán)利要求1-2中任意一項(xiàng)所述的釀酒酵母表達(dá)的長(zhǎng)效重組人絲聚蛋白的基因。

9.如權(quán)利要求8所述的釀酒酵母營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株，其特征在于，所述釀酒酵母營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株的制備及轉(zhuǎn)化包括以下步驟：

步驟一：釀酒酵母表達(dá)體系常用溶液及培養(yǎng)基的配制；

步驟二：含所述釀酒酵母表達(dá)的長(zhǎng)效重組人絲聚蛋白基因的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化釀酒酵母。

10.一種釀酒酵母表達(dá)的長(zhǎng)效重組人絲聚蛋白在保濕化妝品中的應(yīng)用，其特征在于，其采用如權(quán)利要求1-2中任意一項(xiàng)所述的釀酒酵母表達(dá)的長(zhǎng)效重組人絲聚蛋白。