[發明專利]一種快速區分稻瘟病菌交配型的PCR-HRM檢測方法

在審

• 申請號: 202110356410.X
• 申請日: 2021-04-01
• 公開（公告）號: CN113136447A
• 公開（公告）日: 2021-07-20
• 發明（設計）人: 房文文;王海風;郭濤;姜艷芳;張士永
• 申請（專利權）人: 山東省農業科學院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 張夢澤

本發明提供了一種快速區分稻瘟病菌交配型的PCR?HRM檢測方法，屬于分子生物學檢測技術領域，所述引物組包括MAT1?1擴增引物組和MAT1?2擴增引物組。本發明的引物組擴增得到的交配型熔解曲線能夠分型，檢測效果好。基于本發明的引物組進行熒光PCR擴增得到的擴增產物進行熔解曲線分析，獲得熔解溫度，依據熔解溫度能夠快速、準確區分稻瘟病菌交配型。本發明首次提供了一種可快速檢測稻瘟病菌交配型的熒光PCR?HRM檢測引物組，能夠簡化檢測流程，實現高通量檢測，顯著縮短檢測所需時間，適用于大批量的稻瘟病菌交配型的快速檢測。

技術領域

本發明涉及分子生物學檢測技術領域，尤其涉及一種快速區分稻瘟病菌交配型的PCR-HRM檢測方法。

背景技術

有性生殖是真菌的一種生殖方式，分為同宗配合(Homothalllism)和異宗配合(Heterothallism)。同宗配合的子囊真菌通常具有一個交配型基因座，而異宗配合的子囊真菌有一對交配型基因座。異宗配合真菌必須由不同交配型的菌絲細胞結合后才能產生子代。異宗配合的子囊真菌具有MAT1-1和MAT1-2兩個高度異源的交配型基因位點，因此，可通過檢測MAT1-1和MAT1-2基因來判讀異宗配合的子囊真菌的交配型。

由稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)引起的稻瘟病是世界各水稻生產區內廣泛發生、且危害極大的一種真菌性病害。稻瘟病菌屬子囊菌廣大角間座殼屬的異宗配合真菌，具有MAT1-1和MAT1-2兩種交配型。目前檢測交配型的方法主要是利用常規PCR擴增后進行瓊脂糖凝膠電泳檢測，電泳過程中，需要實驗人員逐一進行點樣，根據條帶大小進行區分，這一方法檢測效率較低，難以實現批量化檢測。

發明內容

本發明的目的在于提供一種快速區分稻瘟病菌交配型的PCR-HRM檢測方法，通過熒光PCR擴增和高分辨率熔解曲線能夠區分稻瘟病菌交配型。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了一種快速區分稻瘟病菌交配型的熒光PCR-HRM檢測引物組，包括MAT1-1擴增引物組和MAT1-2擴增引物組；

所述MAT1-1擴增引物組包括MAT1-1-F和MAT1-1-R；

所述MAT1-1-F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；

所述MAT1-1-R的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；

所述MAT1-2擴增引物組包括MAT1-2-F和MAT1-2-R；

所述MAT1-2-F的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；

所述MAT1-2-R的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

本發明提供了一種包括上述方案所述引物組的熒光PCR-HRM檢測試劑盒，所述試劑盒還包括用于熒光PCR擴增的試劑。

本發明提供了一種基于上述方案所述引物組或者上述方案所述試劑盒的熒光PCR-HRM檢測區分稻瘟病菌交配型的方法，包括以下步驟：

1)提取待區分稻瘟病菌的基因組DNA；

2)以所述待區分稻瘟病菌的基因組DNA為模板，采用所述引物組進行熒光PCR擴增反應，得到待區分稻瘟病菌熒光PCR擴增產物；

3)對所述待區分稻瘟病菌熒光PCR擴增產物進行熔解曲線分析，得到待區分稻瘟病菌熔解溫度；

當所述待區分稻瘟病菌熔解溫度為78～80℃時，則所述待區分稻瘟病菌為MAT1-1交配型；當所述待區分稻瘟病菌熔解溫度為82～84℃時，則所述待區分稻瘟病菌為MAT1-2交配型。