[發明專利]一種免疫磁性表面增強拉曼基底檢測絲素蛋白的方法

有效

• 申請號: 202110355006.0
• 申請日: 2021-04-01
• 公開（公告）號: CN113030488B
• 公開（公告）日: 2022-04-01
• 發明（設計）人: 王秉;周杰;李青青;彭志勤;萬軍民
• 申請（專利權）人: 浙江理工大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/543;G01N33/552;G01N33/553;G01N33/577;G01N21/65
• 代理公司: 浙江永航聯科專利代理有限公司 33304
• 代理人: 蔡鼎

本發明涉及文物檢測領域，本發明公開了一種免疫磁性表面增強拉曼基底檢測絲素蛋白的方法，本發明結合表面增強拉曼和抗原抗體的優越性，提供了一種具有表面增強拉曼傳感器的優勢，又兼具免疫特異性的優點的絲素蛋白檢測方法。本發明利用磁珠的順磁性，合成的材料與反應體系可以更好的分離，便于合成材料的洗滌與純化。本發明利用了Au的表面增強效果，且在SiO₂和Fe₃O₄的保護作用下非常的穩定。此外由于抗原抗體的特異性結合，本發明有益于排除各項雜質的干擾，提高了結果的準確性。

技術領域

本發明涉及文物檢測領域，尤其涉及一種免疫磁性表面增強拉曼基底檢測絲素蛋白的方法。

背景技術

中國紡織品文化由來已久，絲綢之路作為中國對外文化交流的一條重要渠道，在中國發展史上畫了濃墨重彩的一筆，出土的絲綢在中國的歷史文化研究中也起到至關重要的作用。所以研究各種絲綢的各種表征手段是對中國絲綢文化研究的關鍵點。

絲綢在長時間的埋藏過程中很難完整保護，由于各種老化機理導致絲綢的表征非常困難，當其結構被破壞時，各種表征結果都將失去他們原有的特征，當發現的墓葬離我們越遙遠，能保留下來的絲綢殘片就越少，各種干擾就越多，所以低檢出限和高特異性就是絲綢研究的關鍵。

發明內容

為了解決上述技術問題，本發明提供了一種免疫磁性表面增強拉曼基底檢測絲素蛋白的方法，本發明結合表面增強拉曼和抗原抗體的優越性，提供了一種具有表面增強拉曼傳感器的優勢，又兼具免疫特異性的優點的絲素蛋白檢測方法。

本發明的具體技術方案為：

一種免疫磁性表面增強拉曼基底檢測絲素蛋白的方法，包括以下步驟：

1）稱取5-6g FeCl₃·6H₂O和2-4gFeSO₄·7H₂O溶解在蒸餾水中，將溶液倒入容器中，在充氮氣的條件下攪拌至溶解；加入3-5gNaOH，70-90℃水浴持續攪拌0.5-1.5h制得Fe₃O₄磁性納米顆粒。

2）稱取200 mg Fe₃O₄于容器中，加入15-20mL濃硝酸，超聲10-30 min，隨后水洗，加入15-25 mL無水乙醇，35-45mL去離子水及 3-5 mL氨水超聲10-30min后取出，攪拌下緩慢滴加3-4mL TEOS，持續攪拌3-5h，隨后乙醇洗，水洗，轉移到比色皿中， 55-65℃條件下真空干燥1-3h得到Fe₃O₄@SiO₂納米顆粒。

3）取150-200 mL去離子水于容器中，加入8-12 mL 1.5-2.5%HAuCl₄，在400-800r/min，120-140℃條件下攪拌20-30 min，隨后加入8-12 mL、40-60mg/mL檸檬酸鈉水溶液，在120-140℃條件下繼續攪拌 20min，然后停止加熱，繼續攪拌至Au 溶膠為室溫。

4）量取30-50 mg Fe₃O₄@SiO₂于容器內，倒入50-100mL無水乙醇超聲清洗 1-10min，重復，再水洗，隨后加入30-50 mL 2-4%的聚二烯丙基二甲基氯化銨溶液，35-45℃搖晃溶液至溶解，攪拌 15-25 min，水洗4-8次，得到聚二烯丙基二甲基氯化銨修飾的 Fe₃O₄@SiO₂。