[發明專利]GLP-1/胰高血糖素雙重激動劑融合蛋白

有效

• 申請號: 202110354251.X
• 申請日: 2021-04-01
• 公開（公告）號: CN113292646B
• 公開（公告）日: 2022-05-13
• 發明（設計）人: 韓為躍
• 申請（專利權）人: 東莞云璟生物技術有限公司
• 主分類號: C07K14/605
• 分類號: C07K14/605;C07K19/00;C12N15/16;C12N15/62;A61K38/26;A61P3/04;A61P3/10;A61P3/06;A61P1/16
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 張璐;徐迅

1.一種胰高血糖素樣肽-1(GLP-1)突變蛋白，其特征在于，所述GLP-1突變蛋白的氨基酸序列是基于SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的第2、10、18、20、21、23、24位具有選自下組的氨基酸殘基的多肽序列：

第2位是Gly或Ser，

第10位是Leu或Tyr，

第18位是Arg或Ala，

第20位是Lys或Gln，

第21位是Glu或Asp，

第23位是Ile或Val，和

第24位是Ala或Gln；

并且，所述GLP-1突變蛋白同時具有結合并激活B類G蛋白偶聯受體GLP-1R的活性和結合胰高血糖素受體的活性，所述GLP-1突變蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:7、8、9中任一項所示。

2.如權利要求1所述的GLP-1突變蛋白，其特征在于，所述GLP-1突變蛋白中，對應于SEQID NO:7所示序列的第12或20位的Lys被利拉魯肽側鏈修飾。

3.一種融合蛋白，其特征在于，所述的融合蛋白從N端到C端具有如式II所示的結構，

A-B-C-D (式II)

式中，

A為無或信號肽；

B為如權利要求1所述的GLP-1突變蛋白；

C為連接肽；

D為Fc片段；

“-”為肽鍵。

4.如權利要求3所述的融合蛋白，其特征在于，所述連接肽的氨基酸序列為(G₄S)_nA或其變體，其中，n為1、2、3、4、5或6。

5.如權利要求3所述的融合蛋白，其特征在于，所述連接肽的氨基酸序列為(G₄S)_nA或其變體，其中，n為3。

6.如權利要求3所述的融合蛋白，其特征在于，所述Fc片段為免疫球蛋白IgG的Fc片段，所述的IgG選自下組：IgG1、IgG2、IgG4。

7.如權利要求3所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白具有選自下組的氨基酸序列：

(a)如SEQ ID NO:12、13或14所示的序列；

并且，所述的融合蛋白同時具有結合并激活B類G蛋白偶聯受體GLP-1R的活性和結合胰高血糖素受體的活性。

8.如權利要求3所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ IDNO:12所示。

9.一種分離的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸編碼如權利要求1所述的GLP-1突變蛋白或權利要求3所述的融合蛋白。

10.一種載體，其特征在于，所述載體包括如權利要求9所述的多核苷酸。

11.一種宿主細胞，其特征在于，所述的宿主細胞含有如權利要求10所述的載體，或染色體中整合有外源的如權利要求9所述的多核苷酸，或表達如權利要求1所述的GLP-1突變蛋白或表達如權利要求3所述的融合蛋白。

12.一種制備如權利要求1所述的GLP-1突變蛋白或如權利要求3所述的融合蛋白的方法，其特征在于，包括步驟：

(i)在合適的條件下，培養如權利要求11所述的宿主細胞，獲得含有如權利要求1所述的GLP-1突變蛋白或如權利要求3所述的融合蛋白的混合物；和

(ii)對步驟(i)中得到的混合物進行純化和/或分離，從而獲得如權利要求1所述的GLP-1突變蛋白或如權利要求3所述的融合蛋白。