[發明專利]活動性結核病標志物、試劑盒、檢測方法及模型構建方法

有效

• 申請號: 202110352760.9
• 申請日: 2021-03-31
• 公開（公告）號: CN113192552B
• 公開（公告）日: 2023-10-13
• 發明（設計）人: 張舒林;何俊才;宋言崢;溫子祿
• 申請（專利權）人: 上海市公共衛生臨床中心
• 主分類號: G16B5/00
• 分類號: G16B5/00;G16B40/10;G16H50/20;G16H50/50;G06F18/214;G06F18/24;G06N20/00
• 代理公司: 上海申匯專利代理有限公司 31001
• 代理人: 翁若瑩

本發明提供了活動性結核病標志物、試劑盒、檢測方法及模型構建方法，其特征在于，活動性結核病診斷標志物為血液樣本中的血漿蛋白生物標志物，所述血漿蛋白生物標志物為包括APOA4蛋白質、CFH蛋白質、CFHR5蛋白質、FGG蛋白質、MBL2蛋白質的一種或多種的聯合標志物；發明首次采用血漿蛋白來源的APOA4、CFH、CFHR5、FGG的聯合標志物作為活動性肺結核檢測的生物標記物，構建了活動性結核病檢測的快速診斷模型，為結核病的臨床診斷提供了新的方向。因此，本發明克服了現有活動性肺結核診斷檢出率低、耗時長等缺點，具有特異性好、靈敏度高的特點，對活動性肺結核的輔助診斷有良好的臨床應用價值。

技術領域

本發明屬于生物醫學技術領域，更具體地，涉及蛋白質組學技術和機器學習算法，構建了涉及血漿蛋白生物標志物的活動性結核病檢測模型。

背景技術

結核病(TB)迄今仍是全球的重大公共衛生問題，是單一病原體所致死亡率最高的感染性疾病，嚴重威脅人類的健康。據世界衛生組織(WHO)估計，在2019年全球約1000萬人新感染結核病，死亡人數近140萬。中國的結核現狀嚴峻，是僅次于印度之后的第二結核大國。結核病的高發病率和死亡率，以及通過空氣傳播，對患者和社會都產生了相當大的負擔。因此，在早期及時而準確地發現結核感染，對于結核病患者的治療及結核病擴散流行的控制是至關重要的。目前，與結核有關的臨床診斷方法均存在缺陷，如痰涂片鏡檢靈敏度較低，無法區分死菌活菌，且在多種環境中不適用；痰結核菌培養需要較長周期(6-8周)，陽性率低(30％)；胸部X射線檢查難以區分肺結核和其他肺部病變；PCR檢測的假陽性和假陰性率均高；結核菌素試驗不能區分結核自然感染和卡介苗接種；血清結核抗體檢測的靈敏度以及特異性目前還有局限。因此，仍需要發現一種特異性強的新的生物學標記物，為結核病的鑒別診斷提供快速、敏感、高效以及穩定的風險預測模型方法。

疾病狀態下患者體內一些維持免疫平衡的蛋白異常表達，導致機體的免疫狀態發生改變。近些年來，檢測機體的一些關鍵分子的異常表達預測疾病風險和治療效果評判已有所報道，研究涉及前列腺癌、肝癌、乳腺癌、肝細胞癌、白血病以及卵巢癌等。結核菌與宿主的免疫防御系統的攻防轉移是結核病發生發展的關鍵，其過程中細菌和機體會通過調節相關蛋白的表達抑制或增強機體的免疫應答。篩選合適的蛋白分子作為結核病診療標志物，是目前結核病的診斷以及鑒別診斷發展的新方向。

發明內容

本發明為解決現有結核病診斷技術存在的特異性不好，靈敏度不高的問題，提供了一種基于血漿蛋白組學技術和機器學習算法的活動性結核病快速檢測模型及其構建方法，對結核病檢測有良好的應用價值。

本發明一方面公開了基于血漿蛋白組學技術和機器學習算法的活動性結核病快速診斷模型中所用診斷結核病的聯合標志物，為血液樣本中的血漿蛋白生物標志物，所述血漿蛋白生物標志物為包括APOA4蛋白質、CFH蛋白質、CFHR5蛋白質、FGG蛋白質、MBL2蛋白質的一種或多種的聯合標志物。

進一步地，所述聯合標志物中APOA4蛋白質的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

進一步地，所述聯合標志物中CFH蛋白質的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

進一步地，所述聯合標志物中CFHR5蛋白質的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。

進一步地，所述聯合標志物中FGG蛋白質的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。

本發明另一方面公開了一種基于血漿蛋白標志物的活動性結核病檢測試劑盒，其特征在于，包括全血樣品中血漿提取分離相關試劑、血漿樣本的蛋白質組學定量分析相關試劑、血漿樣本中APOA4蛋白質、CFH蛋白質、CFHR5蛋白質、FGG蛋白質的蛋白表達水平測定相關試劑；還包括標準品，所述標準品為APOA4蛋白質、CFH蛋白質、CFHR5蛋白質、FGG 蛋白質的一種或多種。