[發(fā)明專利]活動性結(jié)核病標(biāo)志物、試劑盒、檢測方法及模型構(gòu)建方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110352760.9
• 申請日: 2021-03-31
• 公開（公告）號: CN113192552B
• 公開（公告）日: 2023-10-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張舒林;何俊才;宋言崢;溫子祿
• 申請（專利權(quán)）人: 上海市公共衛(wèi)生臨床中心
• 主分類號: G16B5/00
• 分類號: G16B5/00;G16B40/10;G16H50/20;G16H50/50;G06F18/214;G06F18/24;G06N20/00
• 代理公司: 上海申匯專利代理有限公司 31001
• 代理人: 翁若瑩

1.一種基于血漿蛋白標(biāo)志物的活動性結(jié)核病檢測模型的構(gòu)建方法，其特征在于，使用檢測算法構(gòu)建APOA4、CFH、CFHR5、FGG的活動性結(jié)核病快速診斷模型；其檢測算法包括以下步驟：

(1)血漿樣本的收集與處理，從全血中分離血漿樣本，數(shù)據(jù)采集模塊用于樣本數(shù)據(jù)采集，獲取樣本數(shù)據(jù)集；

(2)測定血漿樣本，數(shù)據(jù)處理模塊從樣本中測定血漿蛋白生物標(biāo)志物的指標(biāo)，所述血漿蛋白生物標(biāo)志物具體包括APOA4蛋白質(zhì)、CFH蛋白質(zhì)、CFHR5蛋白質(zhì)、FGG蛋白質(zhì)；

(3)數(shù)據(jù)模型構(gòu)建模塊使用神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)的方法擬合訓(xùn)練集進(jìn)行模型的構(gòu)建，以70％的樣本量作為訓(xùn)練集，30％的樣本量作為測試集，對血漿蛋白標(biāo)志物的表達(dá)進(jìn)行整合分析，記錄最優(yōu)模型參數(shù)；同時閾值計算模塊根據(jù)ROC曲線使用驗(yàn)證集計算模型分類的閾值，構(gòu)建得到活動性結(jié)核病檢測模型，其中所述受試者的血漿樣品中APOA4、FGG的表達(dá)水平相對于正常人受試者的水平的下降及CFH、CFHR5的表達(dá)水平相對于正常人受試者的水平的上升指示所述受試者存在結(jié)核病。

2.一種活動性結(jié)核病診斷標(biāo)志物，其特征在于，為血液樣本中的血漿蛋白生物標(biāo)志物，所述血漿蛋白生物標(biāo)志物為包括APOA4蛋白質(zhì)、CFH蛋白質(zhì)、CFHR5蛋白質(zhì)、FGG蛋白質(zhì)、MBL2蛋白質(zhì)的一種或多種的聯(lián)合標(biāo)志物。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種活動性結(jié)核病診斷標(biāo)志物，其特征在于，所述聯(lián)合標(biāo)志物中APOA4蛋白質(zhì)的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種活動性結(jié)核病診斷標(biāo)志物，其特征在于，所述聯(lián)合標(biāo)志物中CFH蛋白質(zhì)的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種活動性結(jié)核病診斷標(biāo)志物，其特征在于，所述聯(lián)合標(biāo)志物中CFHR5蛋白質(zhì)的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種活動性結(jié)核病診斷標(biāo)志物，其特征在于，所述聯(lián)合標(biāo)志物中FGG蛋白質(zhì)的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。

7.一種基于血漿蛋白標(biāo)志物的活動性結(jié)核病檢測試劑盒，其特征在于，包括全血樣品中血漿提取分離相關(guān)試劑、血漿樣本的蛋白質(zhì)組學(xué)定量分析相關(guān)試劑、血漿樣本中APOA4蛋白質(zhì)、CFH蛋白質(zhì)、CFHR5蛋白質(zhì)、FGG蛋白質(zhì)的蛋白表達(dá)水平測定相關(guān)試劑；還包括標(biāo)準(zhǔn)品，所述標(biāo)準(zhǔn)品為APOA4蛋白質(zhì)、CFH蛋白質(zhì)、CFHR5蛋白質(zhì)、FGG蛋白質(zhì)的一種或多種。

8.一種基于血漿蛋白標(biāo)志物的活動性結(jié)核病檢測試劑盒的檢測方法，其特征在于，試劑盒中的檢測試劑用于測定得自受試者的血漿樣品中的標(biāo)志物蛋白表達(dá)水平，包括以下步驟：

a.測定得自所述受試者血漿中APOA4蛋白質(zhì)、CFH蛋白質(zhì)、CFHR5蛋白質(zhì)、FGG蛋白質(zhì)表達(dá)水平；

b.將受試者血漿中標(biāo)志物蛋白表達(dá)水平與正常受試者中血漿中標(biāo)志物蛋白表達(dá)水平進(jìn)行對比；

c.基于步驟b做出的對比結(jié)果，其中所述受試者的血漿樣品中APOA4、FGG的表達(dá)水平相對于正常人受試者的水平的下降及CFH、CFHR5的表達(dá)水平相對于正常人受試者的水平的上升指示所述受試者存在結(jié)核病。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種基于血漿蛋白標(biāo)志物的活動性結(jié)核病檢測試劑盒的檢測方法，其特征在于，使用TMT-LC/MS檢測受試者的血漿樣品中蛋白質(zhì)的表達(dá)水平，其中所述受試者的血漿樣品中APOA4、FGG的表達(dá)水平相對于正常人受試者的水平的下降及CFH、CFHR5的表達(dá)水平相對于正常人受試者的水平的上升指示所述受試者存在結(jié)核病。

10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種基于血漿蛋白標(biāo)志物的活動性結(jié)核病檢測試劑盒的檢測方法，其特征在于，使用PRM質(zhì)譜方法檢測APOA4、CFH、CFHR5、FGG的表達(dá)水平；其中所述受試者的血漿樣品中APOA4、FGG的表達(dá)水平相對于正常人受試者的水平的下降及CFH、CFHR5的表達(dá)水平相對于正常人受試者的水平的上升指示所述受試者存在結(jié)核病。